成人骨髓源性神经干细胞的致瘤性研究 被引量：14

1

作者 金澎 徐如祥 +3 位作者 姜晓丹 邹雨汐 蔡颖谦 杜谋选 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期10-15,共6页

目的研究体外培养的成人骨髓源性神经干细胞的致瘤性。方法对骨髓源性神经干细胞分别进行细胞形态学观察、刀豆球蛋白A凝集试验和双层软琼脂培养以探明其是否具有恶性转化细胞的形态特征、表面结构及生长特性的变化;利用免疫细胞化学的... 目的研究体外培养的成人骨髓源性神经干细胞的致瘤性。方法对骨髓源性神经干细胞分别进行细胞形态学观察、刀豆球蛋白A凝集试验和双层软琼脂培养以探明其是否具有恶性转化细胞的形态特征、表面结构及生长特性的变化;利用免疫细胞化学的方法检测骨髓源性神经干细胞的端粒酶和肿瘤相关基因的表达;将骨髓源性神经干细胞接种到裸鼠体内观察其成瘤性。结果骨髓源性神经干细胞不具有恶性转化细胞的形态特征,在不同刀豆球蛋白A浓度下均未见明显的凝集反应,在双层软琼脂不能形成细胞克隆;骨髓源性神经干细胞的c-myc、c-fos和p53基因均呈阴性表达,而端粒酶逆转录酶呈弱阳性表达;将骨髓源性神经干细胞接种于裸鼠皮下6个月未见肿瘤形成,亦未见其它组织形成。结论骨髓源性神经干细胞保持了正常细胞的生物学特征,体内和体外的各项指标均未提示其具有致瘤性,体外的培养条件没有使其发生恶性转化,从致瘤性方面证实了骨髓源性神经干细胞临床移植的安全性。 展开更多

关键词 骨髓源性神经干细胞 致瘤性 表达 恶性转化细胞 体内 裸鼠 成人骨髓 细胞克隆 正常细胞 琼脂

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子宫颈癌干细胞的分离培养及生物学特性鉴定 被引量：13

2

作者 冯定庆 李彩荣 +3 位作者 朱园园 彭程 周颖 凌斌 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期272-276,共5页

目的:分离、培养子宫颈癌干细胞,并鉴定其生物学特性。方法:收集19例不同临床分期(ⅠA～ⅡB期)子宫颈癌患者的肿瘤组织,通过机械剪切、酶消化等方法处理后分离获得单个细胞,采用肿瘤细胞球培养液(tumor sphere medium,TSM)培养获得悬浮... 目的:分离、培养子宫颈癌干细胞,并鉴定其生物学特性。方法:收集19例不同临床分期(ⅠA～ⅡB期)子宫颈癌患者的肿瘤组织,通过机械剪切、酶消化等方法处理后分离获得单个细胞,采用肿瘤细胞球培养液(tumor sphere medium,TSM)培养获得悬浮细胞球。收集悬浮细胞球形成细胞,通过有限稀释法观察该细胞的克隆形成能力,MTT法检测紫杉醇(paclitaxel)和多柔比星(adriamycin)对细胞的抑制率,荧光活性细胞分类仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测细胞表面标志物,RT-PCR和Western印迹法检测干细胞、耐药基因及相关癌基因表达。裸鼠皮下接种分离获得的干细胞,观察其成瘤能力,并进行病理类型分析。结果:19例原代细胞经过10～15d培养,其中8例有悬浮细胞球形成,形成比例随肿瘤临床分期的提高而增加。细胞球形成细胞具有克隆形成能力。紫杉醇(100nmol/L)和多柔比星(100nmol/L)对其细胞的平均抑制率分别为(77.65±6.46)%和(48.00±7.15)%,差异有统计学意义(P<0.01)。FACS检测结果提示,细胞表面标志为CD34-CD105-CD44+CK17+;RT-PCR检测结果提示,细胞球表达干细胞标志Oct4和Piwil2,耐药基因ABCG2及相关癌基因c-myc、stat3和sox-2也有mRNA水平的表达;Western印迹法检测结果进一步提示,肿瘤细胞球表达干细胞标志Oct4和Piwil2蛋白。裸鼠皮下接种细胞12周后全部成瘤,且病理类型与来源标本一致。结论:成功分离获得子宫颈癌干细胞,为将来研究子宫颈癌个性化治疗及疗效评价提供了很好的研究模型。 展开更多

关键词 宫颈肿瘤 肿瘤干细胞 致癌性试验 肿瘤标记 生物学

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佛波酯对BALB/c3T3细胞转化早期基因表达的影响 被引量：11

3

作者 敖琳 曹佳 +5 位作者 黄明辉 伍亚舟 刘晋祎 张彦琦 曾志雄 杨梦苏 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期99-102,F003,共5页

　目的　探讨佛波酯(12- O -tetradecanoylphorbol- 13 -acetate,TPA)促进细胞转化早期基因表达谱的变化。方法　以N 甲基 N’ 硝基 N 亚硝基胍 (N methyl N’ nitro N nitrosoguanidine,MNNG)为启动剂,TPA为促癌剂,建立BALB/c3T3细胞... 　目的　探讨佛波酯(12- O -tetradecanoylphorbol- 13 -acetate,TPA)促进细胞转化早期基因表达谱的变化。方法　以N 甲基 N’ 硝基 N 亚硝基胍 (N methyl N’ nitro N nitrosoguanidine,MNNG)为启动剂,TPA为促癌剂,建立BALB/c3T3细胞转化模型。采用锥虫蓝染色法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。采用cDNA微阵列检测TPA处理早期的基因表达谱变化。结果　TPA处理早期可抑制细胞增殖,阻滞细胞于G1 期与S期。TPA处理 4h和 24h后,在检测的1 152个基因中筛选出 19个差异表达基因,其中 9个基因表达上调, 10个基因表达下调。许多差异表达基因的功能与细胞增殖、凋亡和周期调控相关,主要涉及ras和p53基因信号传导通路。结论　TPA在促进BALB/c3T3细胞转化的早期阶段,可影响某些调节细胞周期进展基因的转录表达,从而导致细胞生长阻滞。 展开更多

关键词 TPA 早期 BALB/C 基因表达谱 佛波酯 3T3细胞 细胞增殖 差异表达基因 细胞生长 转化

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携带鼠白细胞介素-12基因重组腺病毒载体的构建及其对致瘤性的影响 被引量：9

4

作者 王建伟 高航 +5 位作者 车广华 王琳 张海英 钱程 陈立 陈远耀 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期291-293,共3页

目的 :构建携带鼠白细胞介素 - 1 2基因腺病毒载体 ( Ad CMVIL- 1 2 )并观察其影响 B1 6黑色素瘤致瘤性的效果。方法 :将鼠 IL- 1 2基因构建进含有 CMV启动子的双顺反子重组腺病毒载体内 ,分离纯化后 ,转染 2 93细胞 ,48h后提取细胞总 R... 目的 :构建携带鼠白细胞介素 - 1 2基因腺病毒载体 ( Ad CMVIL- 1 2 )并观察其影响 B1 6黑色素瘤致瘤性的效果。方法 :将鼠 IL- 1 2基因构建进含有 CMV启动子的双顺反子重组腺病毒载体内 ,分离纯化后 ,转染 2 93细胞 ,48h后提取细胞总 RNA,进行 RT- PCR、琼脂糖凝胶电泳 ,选取特异性片段 TA克隆、测序 ;将 B1 6黑色素瘤细胞与 Ad CMVIL- 1 2在 37℃、5 %CO2 培养箱中孵育2 h后注射到 C57/ BL6小鼠右侧腹股沟皮下 ( MOI=1 0 0 ) ,观察 Ad CMVIL- 1 2对 B1 6黑色素瘤致瘤性的抑制作用。结果 :测序结果证明 Ad CMVIL- 1 2构建成功 ,实验组未见肿瘤生长 ,抑瘤率达1 0 0 %。结论 :成功地构建 Ad CMVIL- 1 2 ,并具有明显的抑制肿瘤生长的作用。 展开更多

关键词 白细胞介素12 AdCMVIL—12 致癌性试验 黑色素瘤

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成石胆汁在胆囊癌致病因素中的作用 被引量：7

5

作者 马浙夫 王忠裕 张俊然 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期268-270,共3页

目的　探讨人的成石胆汁潜在致癌性 ,阐明胆结石与胆囊癌的内在关系 ,为胆结石的治疗提供科学的依据。方法　通过Ames试验及细胞二阶段转化实验 ,分别检测 18例胆固醇结石患者胆汁的肿瘤启动性 (即致突变性 )和促癌性。结果　Ames实验... 目的　探讨人的成石胆汁潜在致癌性 ,阐明胆结石与胆囊癌的内在关系 ,为胆结石的治疗提供科学的依据。方法　通过Ames试验及细胞二阶段转化实验 ,分别检测 18例胆固醇结石患者胆汁的肿瘤启动性 (即致突变性 )和促癌性。结果　Ames实验结果表明 ,胆固醇结石患者的胆汁与正常对照组相比差异无显著意义 ,但可明显增加BALB/c3T3细胞转化灶的形成 (P =0 .0 2 33) ,尤其是无症状胆石组也表现出明显的促癌活性 (P <0 .0 5 )。结论　成石胆汁本身具有潜在的促癌性 ,这一特性在胆囊癌的发病过程中起着重要的作用 ,为胆囊癌的病因学研究提供了直接证据。 展开更多

关键词 胆汁 胆结石 致癌性试验 胆囊肿瘤 胆囊癌 致病因素

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人脂肪间充质干细胞的致瘤性研究 被引量：6

6

作者 秦秀军 张伟 +3 位作者 李建国 魏锦萍 阚卫军 李荣荣 《天津医药》 CAS 北大核心 2013年第2期152-153,I0002,共3页

目的研究人脂肪间充质干细胞是否具有致瘤性,为其临床应用提供安全性依据。方法96只裸鼠分为空白对照组、阳性对照组和脂肪间充质干细胞组,每组32只,雌雄各半。将传代第5代的人脂肪间充质干细胞接种至裸鼠皮下,分别于注射后3d、1个月、... 目的研究人脂肪间充质干细胞是否具有致瘤性,为其临床应用提供安全性依据。方法96只裸鼠分为空白对照组、阳性对照组和脂肪间充质干细胞组,每组32只,雌雄各半。将传代第5代的人脂肪间充质干细胞接种至裸鼠皮下,分别于注射后3d、1个月、3个月、6个月对动物进行解剖检查,观察其肿瘤形成情况;同时用软琼脂克隆形成实验观察人脂肪间充质干细胞形成集落的能力。结果裸鼠体内致瘤实验中,脂肪间充质干细胞组和空白对照组动物大体解剖学观察和病理组织学检查均未见异常。软琼脂克隆形成实验显示人脂肪间充质干细胞未表现出在阻力介质中的克隆生长能力。结论短期传代后的人脂肪间充质干细胞不具致瘤性,有一定安全性。 展开更多

关键词 干细胞 骨髓细胞 细胞分化 致癌性试验 克隆细胞 琼脂 小鼠 近交BALB C

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Balb/c裸鼠体内的干细胞致瘤实验 被引量：5

7

作者 聂德志 宛莹 +5 位作者 贲亮 王英君 刘湘竹 王丽辉 李超 张世冬 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第6期888-893,共6页

背景:干细胞致瘤性研究是临床应用干细胞安全性所面临的实际问题。因此明确干细胞是否具有致瘤性尤为重要。裸鼠在肿瘤学、免疫学、药品及生物制品的安全性评价领域占据愈来愈重要的地位。目的:将神经干细胞、间充质干细胞移植在Balb/c... 背景:干细胞致瘤性研究是临床应用干细胞安全性所面临的实际问题。因此明确干细胞是否具有致瘤性尤为重要。裸鼠在肿瘤学、免疫学、药品及生物制品的安全性评价领域占据愈来愈重要的地位。目的:将神经干细胞、间充质干细胞移植在Balb/c免疫缺陷裸鼠皮下,检测其是否具有致瘤性。方法:将免疫缺陷Balb/c裸鼠随机分为5组,除空白组外,阳性对照组、阴性对照组、神经干细胞组和间充质干细胞组分别将肝癌细胞HepG2、人视网膜色素上皮细胞、传代至第4代的神经干细胞和间充质干细胞接种于裸鼠皮下,于注射后12周进行解剖检查,观察裸鼠移植部位肿瘤形成情况。同时进行软琼脂克隆形成实验,考察神经干细胞和间充质干细胞在体外软琼脂克隆形成情况。结果与结论:裸鼠致瘤性实验结果显示,空白组、阴性对照组、神经干细胞组、间充质干细胞组在接种12周后,未在裸鼠注射部位形成肿瘤,病理组织学检查未见异常。软琼脂克隆形成实验结果显示,神经干细胞和间充质干细胞在软琼脂阻力介质中未表现出细胞形成克隆的能力。提示短期传代后的神经干细胞、间充质干细胞不具有致瘤性。 展开更多

关键词 干细胞 神经干细胞 间充质干细胞 致瘤性 克隆 体内实验 安全性

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低剂量烟草悬凝物诱导正常永生化人支气管上皮细胞慢性恶性转化 被引量：4

8

作者 张诚 吴庆琛 +4 位作者 李强 朱茂祥 杨陟华 潘秀颉 谢俊豪 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期150-155,共6页

目的：用低剂量烟草悬凝物模拟吸烟环境诱导正常永生化人支气管上皮细胞慢性恶性转化,构建恶性转化的细胞模型。方法：通过MTT法及细胞亚急性毒性存活能力检测实验确定慢性诱导物的剂量,以不同剂量的烟草悬凝物对细胞进行单次或多次染毒... 目的：用低剂量烟草悬凝物模拟吸烟环境诱导正常永生化人支气管上皮细胞慢性恶性转化,构建恶性转化的细胞模型。方法：通过MTT法及细胞亚急性毒性存活能力检测实验确定慢性诱导物的剂量,以不同剂量的烟草悬凝物对细胞进行单次或多次染毒,以不染毒细胞为对照。用血清抗性实验和锚着独立生长实验鉴定细胞恶性转化的倾向和恶性特征,比较各组抗血清促分化的能力和集落形成率。结果：以体积分数为0.5、1、2μl/ml的烟草悬凝物对细胞进行单次和多次染毒,各相应剂量组多次染毒和单次染毒与对照组相比,传至第25代细胞,其抗血清促分化的能力均差异明显（P〈0.05）;传至第38代,成功建立细胞恶性转化模型,细胞复层生长,无接触性抑制,染色体异常,转化细胞的锚着独立生长实验克隆形成率均明显高于对照组（P〈0.05）。多次染毒组的恶性转化趋势比单次染毒组强,而且剂量反应关系呈现良好的直线相关（r=0.969,y=42x）。结论：用0.5~2μl/ml烟草悬凝物诱导的正常永生化人支气管上皮细胞恶性转化,可作为模拟吸烟环境下细胞慢性恶性转化的理想模型。 展开更多

关键词 烟草悬凝物 致癌性试验 人支气管上皮细胞 慢性恶性转化

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核干细胞因子基因沉默的HL-60细胞在裸鼠体内致瘤性变化 被引量：4

9

作者 岳保红 付书贞 +4 位作者 孙晓莉 王园园 刘帅 张钦宪 阚全程 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2011年第24期7215-7219,共5页

目的探讨核干细胞因子(NS)基因沉默的HL-60细胞在裸鼠体内致瘤性变化。方法体外合成两条短发夹状RNA(NS-shRNA),选择其中沉默NS基因作用强的一条,转染HL-60细胞后接种于裸鼠体内,另设阴性对照组和空白对照组。定期观察裸鼠成瘤情况,并... 目的探讨核干细胞因子(NS)基因沉默的HL-60细胞在裸鼠体内致瘤性变化。方法体外合成两条短发夹状RNA(NS-shRNA),选择其中沉默NS基因作用强的一条,转染HL-60细胞后接种于裸鼠体内,另设阴性对照组和空白对照组。定期观察裸鼠成瘤情况,并取各组裸鼠的肿瘤组织进行病理切片及HE染色,免疫细胞化学染色法测定NS蛋白。结果 NS-shRNA转染HL-60细胞后接种于裸鼠体内长出肿瘤的时间长于对照组(18～19dvs.14～15d),瘤体肿块明显小于两对照组,肿瘤终体积小于两对照组[(1282.6±434.1)mm3vs.(2533.3±683.1)mm3,(2632.5±621.8)mm3],均存在统计学差异(P<0.05);阴性对照组、空白对照组两组间比较无统计学差异(P>0.05)。转染组结缔组织及血管比阴性对照、空白对照两组少,肿瘤组织中细胞排列松散,留有很多间隙;HL-60细胞大小不均一更明显,核碎裂和小核细胞增多,核染色质致密程度不均一,瘤巨细胞减少。结论 NS基因沉默的HL-60细胞的致瘤能力减弱,可能与NS基因沉默后HL-60细胞的生物学性状改变有关。 展开更多

关键词 HL-60细胞 白血病 致癌性试验 核干细胞因子

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人白介素-2基因转染对原代肾细胞癌的抑瘤作用 被引量：2

10

作者 张晓琴 陈坚 +2 位作者 曹广文 万谟彬 戚中田 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期174-175,179,共3页

目的　研究转人IL 2基因对原代肾细胞癌 (RCC)细胞致瘤性的影响 ,为RCC的基因治疗提供依据。方法　将人IL 2基因与逆转录病毒载体pLNCX连接 ,转染包装细胞 ,经鉴定后 ,感染原代RCC细胞 ,用MTT法测转人IL 2基因的原代RCC的IL 2的活性 ,然... 目的　研究转人IL 2基因对原代肾细胞癌 (RCC)细胞致瘤性的影响 ,为RCC的基因治疗提供依据。方法　将人IL 2基因与逆转录病毒载体pLNCX连接 ,转染包装细胞 ,经鉴定后 ,感染原代RCC细胞 ,用MTT法测转人IL 2基因的原代RCC的IL 2的活性 ,然后 ,将转人IL 2基因的原代RCC和未转染原代RCC分别接种裸鼠 ,观测转IL 2前后RCC细胞致瘤性的变化。结果　转人IL 2的RCC细胞上清液IL 2的生物学活性平均 2 44± 5 2U/ml,接种裸鼠后无肿瘤长出。结论　转人IL 2基因使原代RCC失去了致瘤性 ,转人IL 2基因的RCC细胞可作为瘤苗用于肾细胞癌的治疗。 展开更多

关键词 肾肿瘤 原代肾细胞癌 白细胞介素2 基因治疗

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屏障环境下建立4NQO饮水诱导SD大鼠口腔鳞癌模型 被引量：3

11

作者 廖鹏程 张绪 +2 位作者 谭红 邓婷婷 聂敏海 《广东牙病防治》 2015年第2期66-70,共5页

目的建立与人类发病机理相似的大鼠口腔癌前病变与鳞癌模型,为进一步研究口腔鳞癌的发生发展机制提供实验对象。方法在屏障环境下将质量分数为0.004%的4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline-1-oxide,4NQO)水溶液,作为饮水给予大鼠自... 目的建立与人类发病机理相似的大鼠口腔癌前病变与鳞癌模型,为进一步研究口腔鳞癌的发生发展机制提供实验对象。方法在屏障环境下将质量分数为0.004%的4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline-1-oxide,4NQO)水溶液,作为饮水给予大鼠自行饮用,观察大鼠口腔黏膜的变化,并在第10、14、18、22、24周分5批处死,采集口腔黏膜标本,确定病理分级及病变性质。结果 82只有效实验大鼠中:1舌正常黏膜25.6%(21/82)、上皮单纯增生25.6%(21/82)、轻度异常增生17.1%(14/82)、中度异常增生9.8%(8/82)、重度异常增生2.4%(2/82)、鳞癌19.5%(16/82);2腭正常黏膜20.7%(17/82)、上皮单纯增生23.2%(19/82)、轻度异常增生24.4%(20/82)、中度异常增生14.6%(12/82)、重度异常增生7.3%(6/82)、鳞癌9.8%(8/82)。实验组病理分级结果采用等级资料的多个独立样本的Kruskal-Wallis秩和检验,舌黏膜(χ2=20.738,P<0.005)、腭黏膜(χ2=15.003,P<0.005),结果分布差异均有统计学意义。结论该模型可排除其它外界因素对实验结果的干扰,实验效果明确,是理想的研究口腔鳞癌发生发展机制的动物模型。 展开更多

关键词 屏障环境 4-硝基喹啉-l-氧化物 口腔鳞状细胞癌 动物模型口腔肿瘤 致癌性试验 动物模型

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人脐带间充质干细胞修复大鼠放射复合皮肤损伤及其体外致瘤性 被引量：3

12

作者 苏仲奕 杨在亮 +5 位作者 汤永永 扈江伟 盛宏霞 徐曼 张斌 陈虎 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第37期5993-5997,共5页

背景:许多学者已经通过实验证实了间充质干细胞对于放射损伤具有明显的修复作用。目的:初步研究人脐带间充质干细胞促进放射复合皮肤损伤修复的机制及其体外是否具有致瘤性。方法:取SD大鼠15只,随机分3组(n=5),用直线加速器产生的β射线... 背景:许多学者已经通过实验证实了间充质干细胞对于放射损伤具有明显的修复作用。目的:初步研究人脐带间充质干细胞促进放射复合皮肤损伤修复的机制及其体外是否具有致瘤性。方法:取SD大鼠15只,随机分3组(n=5),用直线加速器产生的β射线(40 Gy)照射大鼠右臀部2.5 cm×2.0 cm的区域,内做一直径约1.5 cm的圆形伤口。在制作大鼠损伤模型后12 h,分别经尾静脉注入5.0×106,1.0×107和2.0×107个人脐带间充质干细胞,腹腔注入荧光素(20 mg/kg),使用IVIS活体成像系统示踪人脐带间充质干细胞在大鼠体内分布。用软琼脂克隆形成实验观察人脐带间充质干细胞形成集落的能力。结果与结论:活体成像实验表明,人脐带间充质干细胞经尾静脉注射后主要在肺脏中积聚。注射2.0×107个人脐带间充质干细胞组大鼠损伤部位出现了细胞积聚;而注射5.0×106个和1.0×107个人脐带间充质干细胞组大鼠损伤部位始终未见荧光信号。体外软琼脂克隆形成实验表明,人脐带间充质干细胞组在软琼脂上均未形成集落,而hela细胞阳性对照组可见明显集落形成。以上结果表明人脐带间充质干细胞可以通过局部迁移促进放射复合皮肤损伤修复,体外实验显示其在短期内不具有致瘤性。 展开更多

关键词 干细胞 移植 放射复合皮肤损伤 人脐带间充质干细胞 活体成像 体外致瘤性

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小鼠胚胎干细胞分化细胞永生化后致瘤性研究 被引量：3

13

作者 沈干 丛笑倩 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期33-39,共7页

目的研究小鼠胚胎干细胞（embryonicstemcells，ESC）诱导分化的血管内皮细胞永生化后的致瘤现象。方法体外培养系中，将诱导的小鼠ESC的拟胚体分化为圆形细胞。通过脂质体将人端粒酶催化亚基（human telomerase reverse transeriptase... 目的研究小鼠胚胎干细胞（embryonicstemcells，ESC）诱导分化的血管内皮细胞永生化后的致瘤现象。方法体外培养系中，将诱导的小鼠ESC的拟胚体分化为圆形细胞。通过脂质体将人端粒酶催化亚基（human telomerase reverse transeriptase，hTERT）基因转染诱导分化中的圆形细胞，应用RT—PCR及免疫组织化学等方法分析、观察诱导分化的血管样结构的组成细胞和被hTERT基因转染的圆形细胞的形态和生物学特性。并将基因转染的细胞植入裸鼠皮下，观察其致瘤性。结果携带hTERT基因、从ESC分化而来的圆形细胞TEC3，在体外可大量增殖，培养的前2d（48h），细胞数就增加了1倍多，至72h细胞数增加了12倍，持续传代，端粒酶活性高表达，95％细胞表达Flk-1、CD34和vWF，并有管道化生长特性。将细胞植入裸鼠皮下后1周有肿瘤形成。结论转染hTERT基因可使小鼠ESC分化细胞持续增殖，植入裸鼠体内具有致瘤性。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 内皮细胞 人端粒酶催化亚基基因 致癌性试验

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喉癌CD133^＋侧群细胞的分离及体内致瘤性分析 被引量：2

14

作者 吴春萍 周梁 +3 位作者 谢明 陶磊 张明 田洁 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期223-227,共5页

目的探索能够有效富集喉癌肿瘤干细胞的分选方法。方法流式细胞仪辅助下联合应用CD133标记及侧群（side population，sP）细胞分选技术检测及分选喉癌Hep-2细胞系中的CD133^＋SP及CD133-SP细胞，将分选所得两亚群细胞以相同的数量级注... 目的探索能够有效富集喉癌肿瘤干细胞的分选方法。方法流式细胞仪辅助下联合应用CD133标记及侧群（side population，sP）细胞分选技术检测及分选喉癌Hep-2细胞系中的CD133^＋SP及CD133-SP细胞，将分选所得两亚群细胞以相同的数量级注入非肥胖糖尿病型／重症联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠右侧腋窝皮下，比较两亚群细胞致瘤性差异，并对两亚群细胞进行细胞周期检测分析。结果CDl33^＋SP及CD133-SP细胞在喉癌Hep-2细胞系中各占（0．30±0．12）％及（17．524-1．59）％。CD133^＋SP在16只NOD／SCID小鼠中的15只腋窝皮下成瘤，CD133-SP细胞仅在16只NOD／SCID小鼠中的7只腋窝皮下成瘤，差异有统计学意义（Fisher精切概率法，P〈0．05）。CD133^＋SP细胞所成瘤体的重量平均（-xs±，下同）为（0．364-0．15）g，而CD133-SP细胞所成瘤体重量平均为（0．084-0．04）g，差异有统计学意义（t=4．64，P〈0．01）。细胞周期检测发现，CD133^＋SP及CD133-SP细胞具有相似的细胞周期分布。结论CD133^＋SP比CD133-SP具备更强的免疫缺陷小鼠体内致瘤能力；SP细胞分选法与CD133标记相结合是一种更有效的富集喉癌肿瘤干细胞的分选方法。 展开更多

关键词 喉肿瘤 肿瘤干细胞 抗原 CD 侧群细胞 致癌性试验

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肺腺癌细胞系A549肿瘤始发细胞的测定 被引量：1

15

作者 孟祥姣 王亚伟 王秀问 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第4期13-17,共5页

目的通过克隆形成及致瘤能力研究肺腺癌细胞系A549肿瘤始发细胞的比例。方法采用有限稀释法,检测细胞单克隆形成的数量及大小;收集来自于1个细胞形成的克隆细胞,种于BALB/C裸鼠皮下,观察其致瘤能力;采用CD133磁珠分选A549细胞,测定CD133... 目的通过克隆形成及致瘤能力研究肺腺癌细胞系A549肿瘤始发细胞的比例。方法采用有限稀释法,检测细胞单克隆形成的数量及大小;收集来自于1个细胞形成的克隆细胞,种于BALB/C裸鼠皮下,观察其致瘤能力;采用CD133磁珠分选A549细胞,测定CD133+、CD133-细胞的克隆形成能力,测定Hoechst33342染色对非SP细胞的增殖能力和单克隆形成能力的影响。结果45%以上的A549细胞能够形成大于100个细胞的大克隆,其传代后又能形成新的克隆,来源于1个大克隆的细胞种植到BALB/C裸鼠身上,10d左右能形成肉眼可见的肿瘤;CD133+、CD133-细胞克隆形成能力相同;Hoechst33342染色能够明显干预细胞的克隆形成及增殖能力。结论45%以上的A549细胞是肿瘤始发细胞。 展开更多

关键词 肿瘤干细胞测定 致瘤性试验 肺肿瘤 克隆细胞 小鼠 近交BALBC

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人端粒酶反转录酶基因感染对人髓核细胞基本特性的影响 被引量：1

16

作者 张丽 关晓明 +2 位作者 马迅 满孝旭 赵胜 《中国药物与临床》 CAS 2013年第S1期1-3,共3页

目的验证人髓核细胞感染人端粒酶反转录酶(hTERT)基因后,髓核细胞基本特性是否发生改变,是否具有致瘤性。方法慢病毒介导hTERT基因感染人髓核细胞并进行蛋白印迹法验证,倒置显微镜观察感染hTERT基因前后髓核细胞形态以及Ⅱ型胶原免疫组... 目的验证人髓核细胞感染人端粒酶反转录酶(hTERT)基因后,髓核细胞基本特性是否发生改变,是否具有致瘤性。方法慢病毒介导hTERT基因感染人髓核细胞并进行蛋白印迹法验证,倒置显微镜观察感染hTERT基因前后髓核细胞形态以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,流式细胞术测定感染前后人髓核细胞CD24表达,以Hela细胞为对照,将髓核细胞注射裸鼠背部皮下,定期肉眼观察成瘤情况,2个月后取材行苏木素-伊红(HE)染色鉴定。结果感染hTERT后蛋白印迹法验证人髓核细胞hTERT基因表达阳性,感染前后髓核细胞形态及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色无明显变化,呈三角形或多边形贴壁生长,Ⅱ型胶原染色均为阳性;流式细胞术检测感染hTERT前后髓核细胞CD24表达均为阳性,阳性率>50%;致瘤性实验结果显示,注射Hela细胞的裸鼠背部皮下长出肿块,肿块组织经石蜡包埋切片后HE染色,染色为深紫色肿瘤细胞,注射髓核细胞的裸鼠未观察到肿物,取注射部位组织行HE染色,结果为浅红色正常组织。结论慢病毒介导hTERT基因感染人髓核细胞后,人髓核细胞基本特性没有发生明显变化,且不具有致瘤性,为深入研究髓核细胞奠定基础。 展开更多

关键词 椎间盘 髓核细胞 致癌性试验

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穿梭质粒pCEPmB_7的构建及其对小鼠宫颈癌U_(14)细胞体内生长的影 被引量：1

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作者 章红 江全 +3 位作者 袁铿 戴志芳 袁芳 江紫生 《江西医学院学报》 1999年第1期1-5,共5页

目的：构建可用于肿瘤基因治疗研究的基因表达载体ｐＣＥＰｍＢ７，并研究该质粒转染小鼠宫颈癌Ｕ１４细胞后的体内致瘤性变化。方法：（１）用限制性核酸内切酶ＨｉｎｄⅢ和ＸｈｏⅠ分别对质粒ｐＣＥＰ４和ｐＬＸＳＮｍＢ７进行双酶切... 目的：构建可用于肿瘤基因治疗研究的基因表达载体ｐＣＥＰｍＢ７，并研究该质粒转染小鼠宫颈癌Ｕ１４细胞后的体内致瘤性变化。方法：（１）用限制性核酸内切酶ＨｉｎｄⅢ和ＸｈｏⅠ分别对质粒ｐＣＥＰ４和ｐＬＸＳＮｍＢ７进行双酶切，分别回收１０．４ｋｂ的线性ｐＣＥＰ４ＤＮＡ片断和０．９ｋｂ的ｍＢ７ｃＤＮＡ片断，将上述两片断混合，在Ｔ４－ＤＮＡ连接酶的作用下连接，连接液转化受体菌ＴＧ－１，琼脂糖凝胶电泳鉴定连接是否正确；（２）用电穿孔法将ｐＣＥＰｍＢ７转染Ｕ１４细胞，转染后的细胞经ＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ（２００μｇ／ｍｌ）选择培养２周后得到选择阳性混合克隆细胞Ｕ１４／ｐＣＥＰｍＢ７，用流式细胞仪检测Ｕ１４／ｐＣＥＰｍＢ７细胞中Ｂ７表达阳性细胞的百分率；（３）将Ｕ１４和Ｕ１４／ｐＣＥＰｍＢ７细胞分别以不同的剂量皮下接种昆明鼠，找出两种细胞的最小成瘤剂量（ｍｉｎｉｍａｌｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｄｏｓｅｓ，ＭｉＴＤ）。结果：（１）连接后的新质粒经双酶切和单酶切后，琼脂糖凝胶电泳鉴定连接正确，该质粒即为ｐＣＥＰｍＢ７；（２）流式细胞仪检测结果显示，Ｕ１４细胞的Ｂ７表达阳性率为５．２４％，Ｕ１４／ｐＣＥＰｍＢ７细胞的Ｂ７表达阳性率为４? 展开更多

关键词 质粒 基因表达 共刺激分子B7 细胞系 致癌性试验 电穿孔法

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4NQO诱发两种品系大鼠舌癌过程中p53蛋白的表达特点 被引量：1

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作者 李铁军 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期126-128,I010,共4页

目的　了解Dark Agouti (DA)和Wistar/Furth (WF)两种品系的大鼠舌粘膜上皮在 4 硝基喹啉 1 氧化物 (4 nitroquinoline 1 oxide ,4NQO)诱导舌癌过程中p5 3蛋白表达的动态变化。方法　实验动物的饮水中加入 4NQO(0 0 0 1% ) ,观察第 2、... 目的　了解Dark Agouti (DA)和Wistar/Furth (WF)两种品系的大鼠舌粘膜上皮在 4 硝基喹啉 1 氧化物 (4 nitroquinoline 1 oxide ,4NQO)诱导舌癌过程中p5 3蛋白表达的动态变化。方法　实验动物的饮水中加入 4NQO(0 0 0 1% ) ,观察第 2、4、8、12、16和 2 6周时实验大鼠舌粘膜对p5 3的免疫组化表达。结果　p5 3的阳性反应在DA大鼠舌粘膜中出现早 ,且随着实验的推移 ,舌粘膜内的p5 3阳性细胞簇数目趋于增加 ,特别在实验后期尤为显著 ;WF大鼠各实验组间p5 3表达的水平较低 ,且变化不大。结论　p5 3蛋白的表达水平反应了DA和WF大鼠对 展开更多

关键词 大鼠 舌肿瘤 P53蛋白 4NQO

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骨髓基质干细胞在Sprague-Dawley大鼠颅内移植致肿瘤形成3例报告 被引量：1

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作者 刘振林 王亮 +6 位作者 刘晓智 刘洪良 宋军 苏治国 宋迎 李金艳 姜忠敏 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期881-885,共5页

目的:探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)颅内移植后潜在的恶变致瘤的可能性及机制。方法:选取在20只Sprague-Dawley大鼠体内移植BMSCs实验中发现的3只对侧肢体偏瘫症状逐渐加重的实验大鼠,采用MRI检查其颅内是否发... 目的:探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)颅内移植后潜在的恶变致瘤的可能性及机制。方法:选取在20只Sprague-Dawley大鼠体内移植BMSCs实验中发现的3只对侧肢体偏瘫症状逐渐加重的实验大鼠,采用MRI检查其颅内是否发生占位性改变,观察并记录此3只大鼠的生存期;获取死亡大鼠的含瘤脑组织,采用端粒扩增(telemere repeat amplifi cation protocol,TRAP)-PCR-酶联免疫(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测细胞端粒酶活性,免疫组织化学法检测含瘤脑组织中细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、巢蛋白(nestin)和胶质纤维酸性蛋白(glial fi brillary acidic protein,GFAP)的表达,蛋白质印迹法检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的相对表达量。以无瘤正常大鼠脑组织为对照组。结果:20只BMSCs移植大鼠中共有3只实验鼠出现左侧肢体偏瘫且呈进行性加重,3只大鼠的生存期分别为129、174和187d;TRAP-PCR-ELISA结果显示,3只含瘤组织中细胞端粒酶活性均高于无瘤组;免疫组织化学结果显示,3只大鼠含瘤组织中PCNA和nestin的蛋白表达水平均高于无瘤组,GFAP表达水平则低于无瘤组;蛋白印迹法检测结果提示,与无瘤组织比较,3例肿瘤组织中有1只EGFR表达增高,2只VEGF表达增高,而MMP-9表达水平差异均无统计学意义。结论:长期体外培养的BMSCs可出现端粒酶活性和细胞增殖活力增强,以及部分癌基因激活等致瘤表型,提示干细胞体内移植存在潜在的成瘤可能性。 展开更多

关键词 脑肿瘤 干细胞 细胞移植 致癌性试验

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体外扩增大鼠肌源性干细胞的安全性研究 被引量：1

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作者 张文 李秉枢 +2 位作者 李爱斌 曹景云 奚文裕 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2014年第1期26-31,共6页

目的:研究经体外扩增的大鼠肌源性干细胞的安全性,为将来肌源性干细胞移植治疗压力性尿失禁的临床应用提供参考。方法:分离培养出大鼠肌源性干细胞,在体外传代培养,对传至第10代(PP6-10)的细胞进行刀豆球蛋白A(ConA)凝聚实验、双层软琼... 目的:研究经体外扩增的大鼠肌源性干细胞的安全性,为将来肌源性干细胞移植治疗压力性尿失禁的临床应用提供参考。方法:分离培养出大鼠肌源性干细胞,在体外传代培养,对传至第10代(PP6-10)的细胞进行刀豆球蛋白A(ConA)凝聚实验、双层软琼脂培养实验初步分析细胞表面结构和生长特性是否发生恶变;采用免疫细胞化学的方法检测PP6-10的端粒酶活性以及c-myc,p53,c-fos肿瘤相关基因的表达情况;采用裸鼠皮下致瘤实验观察其是否具备致瘤性。结果:体外培养至第10代以内的大鼠肌源性干细胞在培养瓶底分布均匀,贴壁后多为纺锤形或梭形,与原代培养的肌源性干细胞形态相比无明显改变;在不同浓度的ConA溶液中,PP6-10均未产生凝聚反应;将PP6-10置于双层软琼脂中培养12d,未见细胞克隆形成,培养至20d,细胞数量明显减少;通过免疫细胞化学方法检测PP6-10中的c-myc,p53和c-fos等肿瘤相关基因的表达结果均为阴性,PP6-10中的端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达结果呈弱阳性;将不同浓度的PP6-10接种于裸鼠皮下,观察4个月后接种部位没有肿块形成,病检其接种部位以及肝脏、肺脏均无异常表现。结论:大鼠肌源性干细胞体外培养至第10代后没有发生突变,不具备体内致瘤性,初步证实了体外传至第10代的大鼠肌源性干细胞的安全性。 展开更多

关键词 肌源性干细胞 体外培养 致瘤性实验

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