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专家警告与宠物犬亲嘴易致牙病和掉牙
1
《药物与人》 2012年第12期7-7,共1页
狗是人类最好的朋友。然而与宠物犬亲密过度则会导致健康问题。英国《口腔生物学档案》杂志刊登一项新研究告诫．与宠物犬亲嘴的人或者让宠物犬舔自己嘴巴的宠物主更容易通过人犬交叉传染而感染牙病。因为“人犬亲吻”会导致危险口腔细... 狗是人类最好的朋友。然而与宠物犬亲密过度则会导致健康问题。英国《口腔生物学档案》杂志刊登一项新研究告诫．与宠物犬亲嘴的人或者让宠物犬舔自己嘴巴的宠物主更容易通过人犬交叉传染而感染牙病。因为“人犬亲吻”会导致危险口腔细菌的交叉传染。如不及时治疗，则容易导致口腔感染及牙周炎。 展开更多
关键词 宠物犬 牙病 掉牙 专家 交叉传染 口腔感染 口腔生物学 健康问题
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弓形虫多表位基因重组抗原在弓形虫免疫检测中的应用 被引量：8
2
作者 杨培梁 李华 +3 位作者 周晓红 彭鸿娟 吴焜 陈晓光 《热带医学杂志》 CAS 2007年第9期853-855,共3页
目的评价弓形虫多表位基因重组抗原在弓形虫感染诊断中的效果,探索多表位抗原在弓形虫免疫检测中的应用前景。方法以Ni-NTA Agarose和割胶电渗两步纯化法,获取弓形虫多表位基因的原核表达纯化产物rMAG,以适宜浓度的rMAG包被ELISA微孔板... 目的评价弓形虫多表位基因重组抗原在弓形虫感染诊断中的效果,探索多表位抗原在弓形虫免疫检测中的应用前景。方法以Ni-NTA Agarose和割胶电渗两步纯化法,获取弓形虫多表位基因的原核表达纯化产物rMAG,以适宜浓度的rMAG包被ELISA微孔板,分别检测弓形虫急性和慢性感染血清,评价试剂盒检测的敏感性和特异性。结果经Ni-NTAAgarose和割胶纯化,得到了纯度为95.86%的弓形虫多表位重组可溶性抗原。以3!g/ml的抗原浓度包被ELISA微孔板,对兔和小鼠的急慢性弓形虫感染血清进行了检测。结果检测小鼠血清141份,其中慢性感染弓形虫小鼠血清117份、正常小鼠血清24份,检测体系的敏感性为88.88%,特异性为91.67%,一致性为89.36%。检测兔血清24份,其中急性感染弓形虫兔血清18份,正常兔血清6份,阳性血清检出率为94.4%,总一致性为91.5%。结论以弓形虫多表位重组抗原构建的ELISA试剂盒既可以检测弓形虫急性感染血清,又可以检测弓形虫慢性感染血清,具有一定的应用前景。 展开更多
关键词 弓形虫 多表位基因 重组抗原 免疫诊断 ELISA试剂盒
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Chinese1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的基因克隆表达及生物信息学分析
3
作者 唐媛媛 莫绪维 +3 位作者 陈鹤 李群 蔡亦红 沈继龙 《安徽医药》 CAS 2015年第4期675-679,共5页
目的构建弓形虫Chinese 1基因型Tg Ct Wh3(以后均简称Wh3)株棒状体蛋白(rhoptry protein,ROPs)16的原核和真核重组表达质粒及其3D结构。方法参照ROP16序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫Chinese 1基因型Wh3株基因组DNA中扩增出编码ROP16... 目的构建弓形虫Chinese 1基因型Tg Ct Wh3(以后均简称Wh3)株棒状体蛋白(rhoptry protein,ROPs)16的原核和真核重组表达质粒及其3D结构。方法参照ROP16序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫Chinese 1基因型Wh3株基因组DNA中扩增出编码ROP16的基因片段,克隆至p MD18-T载体;经PCR及测序分析鉴定;阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达载体p ET-28a和真核表达载体p EGFP-C2,分别转化大肠杆菌BL21和DH5α,PCR和酶切鉴定转化菌落插入的序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达;将构建的真核重组质粒经脂质体转染293T细胞,观察其在细胞中表达;采用生物信息学方法分析构建了蛋白的3D结构。结果各组均PCR扩增出约2.1 kb ROP16基因的特异片段,序列检测结果均正确;分别亚克隆到原核表达载体p ET-28a和真核表达载体p EGFP-C2中,成功构建了Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的原核表达质粒和真核表达质粒;原核表达质粒在大肠杆菌中表达了ROP16的融合蛋白;真核表达质粒在293T细胞中成功表达,成功构建出ROP16基因的3D结构图。结论以p ET-28a和p EGFP-C2为载体,分别成功构建并表达了ROP16的原核和真核重组质粒,并构建出其3D结构图。 展开更多
关键词 弓形虫 棒状体蛋白16 克隆 表达 生物信息学分析
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弓形虫速殖子和缓殖子相互转换机制的研究进展
4
作者 杨培梁 彭鸿娟 《国外医学（寄生虫病分册）》 2001年第2期51-55,共5页
弓形虫在中间宿主内以速殖子和缓殖子两种滋养体形式存在。其机会性致病与速殖子和缓殖子之间的互相转换密切相关,揭示此转换机制将有助于寻找更有效的途径以控制弓形虫的急性和慢性感染。本文刈近年来有关这种转换机制的研究进展加以... 弓形虫在中间宿主内以速殖子和缓殖子两种滋养体形式存在。其机会性致病与速殖子和缓殖子之间的互相转换密切相关,揭示此转换机制将有助于寻找更有效的途径以控制弓形虫的急性和慢性感染。本文刈近年来有关这种转换机制的研究进展加以综述。 展开更多
关键词 弓形虫 速殖子 缓殖子 转换机制 研究进展
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弓形虫磷酸丙糖异构酶原核表达及免疫保护的初步研究 被引量：4
5
作者 沈双 殷旭仁 +4 位作者 宋丽君 王玠 柯雪丹 周伟 余传信 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期780-783,共4页
目的克隆刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶(Triosephosphate isomerase,TPI)基因,原核表达和纯化蛋白,研究其对弓形虫感染小鼠的免疫保护作用。方法抽提弓形虫速殖子总RNA,利用PCR技术扩增刚地弓形虫TPI基因,构建重组原核表达载体TPI/p ET-28a(... 目的克隆刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶(Triosephosphate isomerase,TPI)基因,原核表达和纯化蛋白,研究其对弓形虫感染小鼠的免疫保护作用。方法抽提弓形虫速殖子总RNA,利用PCR技术扩增刚地弓形虫TPI基因,构建重组原核表达载体TPI/p ET-28a(+),转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,镍亲和层析法纯化目的蛋白。将与佐剂乳化后的TPI蛋白对小鼠颈背部多点皮内免疫,间隔2周,连续免疫4次,最后一次为加强免疫,同时设置佐剂对照组与正常对照组。尾静脉采血检测小鼠血清抗体效价。以400个弓形虫速殖子/只接种小鼠腹腔,观察记录各组小鼠的生存率。结果成功扩增到弓形虫TPI基因,构建原核表达载体TPI/p ET-28a(+),获得纯化的TPI蛋白,TPI免疫4次后的小鼠血清抗体效价可达1:100 000以上,且生存期显著高于佐剂对照组与正常对照组。结论弓形虫TPI蛋白对弓形虫感染小鼠具有一定的免疫保护作用,为研究弓形虫疫苗奠定了理论基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 磷酸丙糖异构酶 原核表达 免疫保护
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弓形虫与宿主细胞相互作用研究进展 被引量：5
6
作者 朱勇 杨秋林 《微生物学免疫学进展》 2014年第5期77-80,共4页
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)在细胞内严格寄生,因此它能引起哺乳类宿主(包括人类)细胞的感染。凋亡在宿主细胞与弓形虫的相互作用中发挥着重要的作用。在未受感染的宿主细胞中,凋亡被间接机制所限制,因而宿主细胞能够对弓形虫发生炎... 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)在细胞内严格寄生,因此它能引起哺乳类宿主(包括人类)细胞的感染。凋亡在宿主细胞与弓形虫的相互作用中发挥着重要的作用。在未受感染的宿主细胞中,凋亡被间接机制所限制,因而宿主细胞能够对弓形虫发生炎症反应。与之相反,在被感染的宿主细胞中,由于凋亡信号级联反应直接受到了干扰,从而抑制了宿主细胞凋亡,这就有利于弓形虫在宿主细胞内的生存和发育。值得注意的是,弓形虫调节和抑制凋亡的两种能力,需要一个精密的调节系统来调控弓形虫和宿主细胞的相互作用,以维持弓形虫稳定的持续感染。重点从弓形虫有关的宿主细胞的凋亡方面进行了介绍。 展开更多
关键词 弓形虫 细胞凋亡 相互作用 促进 抑制
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刚地弓形虫ROP12蛋白的生物信息学分析 被引量：11
7
作者 郭玲玲 王春苗 +4 位作者 张进顺 张晓磊 贾晓晖 姜文静 刘楠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第6期531-535,共5页
目的通过在线生物程序分析刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白12(ROP12)的生物信息学特性。方法通过在线ProtParam、SOSUI、SOPMA、TMHMM、MotifScan及SYFPEITHI等程序,同时结合DNASTAR、DNAMAN生物信息学软件,分析TgROP12蛋白的... 目的通过在线生物程序分析刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白12(ROP12)的生物信息学特性。方法通过在线ProtParam、SOSUI、SOPMA、TMHMM、MotifScan及SYFPEITHI等程序,同时结合DNASTAR、DNAMAN生物信息学软件,分析TgROP12蛋白的生物学特性,如理化性质、二级结构、结构域及抗原表位等。结果TgROP12蛋白含有236个氨基酸,其为分子式C1125H1786N308O360S3,其分子质量和理论等电点分别为25.48ku和4.53。TgROP12蛋白具有信号肽序列和跨膜结构区域,其二级结构中β-转角和无规则卷曲分别占7.20%和44.92%;TgROP12蛋白含有8个亲水性较高(临界值为2.0)的区域,10个表面可及性较高(临界值为1.9)的区域;TgROP12蛋白含有保守结构区域和翻译后修饰位点各6个,并含有9个B细胞抗原表位和6个T细胞抗原表位。结论生物信息学分析显示TgROP12蛋白的免疫原性较好,可作为弓形虫病疫苗候选分子。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 棒状体蛋白12 生物信息学 分析
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金丝桃素体外抗刚地弓形虫速殖子效果的观察 被引量：3
8
作者 杨小迪 孙希萌 +13 位作者 王旗 崔洁 计永胜 薛洪宝 胡守锋 苏胖胖 李江艳 孟令文 乔继琛 丁忆晗 宋迪 吴琦 方强 陈兴智 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期203-207,共5页
目的观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。方法将生理盐水(A组)和终浓度为5μg/ml(B组)、50μg/ml(C组)、500μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×... 目的观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。方法将生理盐水(A组)和终浓度为5μg/ml(B组)、50μg/ml(C组)、500μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×106个/孔的24孔培养板中,于2、4、6 h后收集虫体,台盼蓝染色检测速殖子着色率,吉氏染色观察速殖子形态和结构变化,透射电镜观察速殖子超微结构的变化,流式细胞仪检测相同处理的携带黄色荧光蛋白的弓形虫的存活情况。结果弓形虫速殖子经不同浓度金丝桃素作用2 h后,B组、C组和D组虫体的台盼蓝着色率分别为(11.0±3.6)%、(25.0±6.3)%和(40.0±2.7)%,D组着色率高于C组和B组(P<0.01),3组均高于A组(6.0±3.0)%,但B组和A组间差异无统计学意义(P>0.05)。作用4 h后,D组着色率为(97.0±2.0)%,高于C组(30.0±7.2)%、B组(20.0±3.0)%和A组(10.0±1.0)%(P<0.01);作用6 h后,D组着色率为(98.0±1.7)%,亦高于C组(42.7±5.5)%、B组(34.0±6.6)%和A组(19.3±4.9)%,两两比较,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。吉氏染色观察发现,随时间的延长和剂量的增高,虫体两端逐渐变圆、肿胀、坏死。透射电镜观察结果显示,随金丝桃素作用时间延长,虫体逐渐肿胀,胞膜与基质间出现明显空隙,虫体内空泡增多、变大,胞膜破裂,内部结构溶解。流式细胞仪检测结果表明,弓形虫速殖子存活率在金丝桃素作用后的各时间段内与对照组间差异有统计学意义(P<0.01);金丝桃素作用2 h后,D组无弓形虫存活,C组弓形虫存活率为(7.9±1.9)%,低于B组(38.1±5.5)%和A组(81.8±6.0)%(P<0.01);作用4 h后,C组无弓形虫存活;B组在作用4 h和6 h后,弓形虫存活率分别为(14.3±7.9)%和(1.4±1.8)%,均低于A组的(73.8±11.3)%和(64.1±14.4)%(P<0.01)。结论金丝桃素具有较强的体外抗弓形虫速殖子效果,且随剂量增高和作用时间延长抗虫效果更明显。 展开更多
关键词 金丝桃素 刚地弓形虫 速殖子 体外 效果
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刚地弓形虫滑行相关蛋白的研究进展 被引量：5
9
作者 李润花 殷国荣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期463-467,共5页
顶复门寄生虫入侵宿主细胞的能力是其生存和致病的关键。刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是顶复门的一种专性细胞内寄生虫,无论其滑行、入侵或逸出感染细胞,都必须依靠被称为肌-动球蛋白马达(actomyosin motor,AMM)的装置提供动力。AMM... 顶复门寄生虫入侵宿主细胞的能力是其生存和致病的关键。刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是顶复门的一种专性细胞内寄生虫,无论其滑行、入侵或逸出感染细胞,都必须依靠被称为肌-动球蛋白马达(actomyosin motor,AMM)的装置提供动力。AMM主要由肌球蛋白A、1条肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC1)和2条必需轻链(essential light chain,ELC)1、2以及滑行相关蛋白(gliding-associated protein,GAP)组成。目前已经发现的GAP家族包括GAP45、GAP50、GAP80、GAP70和GAP40,它们是构成驱动寄生虫运动的滑行体的重要成分。滑行体是一个存在于寄生虫质膜与内膜复合物之间的以肌-动球蛋白为基础的动力装置。本文概述了目前对GAP构建与功能的理解以及弓形虫运动的分子基础,同时对GAP作为弓形虫病疫苗候选抗原分子作了展望。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 滑行相关蛋白 滑行运动 肌-动球蛋白马达 滑行体
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弓形虫感染家兔精液中虫体DNA检测初报
10
作者 刘世国 杨献军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期263-264,278,共3页
目的了解弓形虫感染家兔精液中是否有虫体存在，探明虫体在精液中动态变化情况。方法用RH株弓形虫速殖子不同剂量经腹腔感染家兔6只。在家兔感染前后分别采集精液，-40℃冻存备用，分别用普通PCR检测弓形虫感染家兔精液中弓形虫DNA。结... 目的了解弓形虫感染家兔精液中是否有虫体存在，探明虫体在精液中动态变化情况。方法用RH株弓形虫速殖子不同剂量经腹腔感染家兔6只。在家兔感染前后分别采集精液，-40℃冻存备用，分别用普通PCR检测弓形虫感染家兔精液中弓形虫DNA。结果5只家兔在感染后的8～14d死亡，仅1只家兔在感染后的8d和72d，用PCR检测手段在精液中均可检测到弓形虫DNA。结论弓形虫感染雄兔精液中有虫体存在。 展开更多
关键词 弓形虫 家兔 精液 PCR
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弓形虫IgG抗体检测试剂用血清国家参考品的制备 被引量：4
11
作者 张瑾 辛晓芳 +3 位作者 薄淑英 杨英超 张影 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期702-704,共3页
目的制备弓形虫IgG抗体检测试剂用血清国家参考品。方法收集弓形虫IgG抗体阳性血清和正常人血清,用6个厂家的弓形虫IgG检测试剂盒进行筛选,并采用染色试验和凝集试验予以确证,采用弓形虫IgG抗体国际标准品对阳性血清进行标定。参考品经... 目的制备弓形虫IgG抗体检测试剂用血清国家参考品。方法收集弓形虫IgG抗体阳性血清和正常人血清,用6个厂家的弓形虫IgG检测试剂盒进行筛选,并采用染色试验和凝集试验予以确证,采用弓形虫IgG抗体国际标准品对阳性血清进行标定。参考品经协作标定,确定最低检出量标准。结果确定此套血清国家参考品共24份,其中阳性参考品9份(包括最低检出量参考品1份),阴性参考品15份。结论制备了第1套弓形虫IgG抗体检测试剂用血清国家参考品,并建立了相应的质量标准,已被国家有关部门批准正式使用。 展开更多
关键词 弓形虫 免疫球蛋白G 抗体 血清 国家参考品
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蒿甲醚脂质体体外抑制刚地弓形虫增殖作用的研究
12
作者 赵紫琪 吕芳丽 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2023年第4期446-451,共6页
目的探讨蒿甲醚脂质体(ARM‑Lip)体外抑制刚地弓形虫(简称弓形虫)速殖子增殖的作用。方法将含有1×104个人宫颈癌细胞置于96孔平底细胞培养板中培养,每孔100μl,设置不同浓度的ARM‑Lip组(3.125、6.250、12.500、25.000、50.000、100.... 目的探讨蒿甲醚脂质体(ARM‑Lip)体外抑制刚地弓形虫(简称弓形虫)速殖子增殖的作用。方法将含有1×104个人宫颈癌细胞置于96孔平底细胞培养板中培养,每孔100μl,设置不同浓度的ARM‑Lip组(3.125、6.250、12.500、25.000、50.000、100.000、200.000、400.000和800.000μmol/L),对照组(仅含1×10^(4)个人宫颈癌细胞)和空白组(仅含培养液),24 h后ARM‑Lip组每孔分别加入对应药物100μl,48 h后各孔均加入10μl CCK‑8溶液,1 h后使用酶标仪检测450 nm波长处的吸光度(A值),计算细胞存活率和ARM‑Lip的半数抑制浓度(IC50)。进一步采用稳定表达绿色荧光的RH株(RH‑GFP)弓形虫速殖子感染人宫颈癌细胞,与不同浓度的ARMLip进行共培育,筛选细胞存活率大于50%的安全浓度的ARM‑Lip组,同时设置浓度为400μmol/L的磺胺嘧啶(SDZ)组和未加药组。荧光显微镜观察24、48和72 h后速殖子的增殖情况,测量共培养48 h时各组平均荧光灰度值,选取最佳浓度ARM‑Lip组。吉氏染色后,光学显微镜下观察各组细胞内的纳虫空泡和弓形虫速殖子的生长情况并计数。组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用最小显著性差异法检验。结果ARM‑Lip在25μmol/L或以下浓度对人宫颈癌细胞几乎无毒性,IC50为285.1μmol/L。经100.000、200.000、400.000和800.000μmol/L的ARMLip处理后,平均细胞存活率分别为89.03%、76.30%、42.12%和27.85%,选取6.250、12.500、25.000、50.000和100.000μmol/L等5个浓度进行后续实验。荧光显微镜下可见未加药组弓形虫RH‑GFP株速殖子大量增殖,形态正常,呈现高强度的绿色荧光;随着ARM‑Lip浓度的增加,绿色荧光强度逐渐减弱。ARM‑Lip体外抑制弓形虫繁殖的最佳作用浓度为100.000μmol/L,最佳作用时间为48 h。未加药组、ARM‑Lip组(100.000μmol/L)和SDZ组作用48 h后,荧光灰度值分别为89.92±1.12、35.74±1.55和7.34±0.60(F=7916.301,P<0.01),ARM‑Lip组和SDZ组的平均� 展开更多
关键词 刚地弓形虫 速殖子 蒿甲醚脂质体 人宫颈癌细胞 纳虫空泡
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弓形虫表面抗原P22蛋白的研究进展 被引量：4
13
作者 陈义忠 林建银 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2005年第1期67-70,共4页
关键词 弓形虫 表面抗原 P22蛋白 蛋白结构 膜蛋白
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弓形虫ROP2-P30重组真核表达质粒的构建及其免疫效应的初步分析 被引量：4
14
作者 钟晓芝 李文姝 +3 位作者 张丽芳 石朝辉 陈俊 闵太善 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第7期505-508,共4页
目的构建弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)融合的重组真核表达质粒,观察融合抗原ROP2-P30以DNA免疫方式在体内的免疫学效应。方法以重组质粒pET28b/ROP2-P30为模板,利用分子克隆技术构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/ROP2-P30,经... 目的构建弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)融合的重组真核表达质粒,观察融合抗原ROP2-P30以DNA免疫方式在体内的免疫学效应。方法以重组质粒pET28b/ROP2-P30为模板,利用分子克隆技术构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/ROP2-P30,经PCR和酶切鉴定正确后,体外转染COS-7细胞,Westernblot检测ROP2-P30表达。重组质粒pcDNA3.1/ROP2-P30以每鼠100μg混合透明质酸酶10U的剂量肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,以弓形虫虫体裂解抗原作包被抗原,ELISA法测定免疫小鼠血清IgG抗体,免疫结束2周后,以约100个弓形虫速殖子攻击感染小鼠,观察小鼠生存状况。结果PCR和酶切鉴定表明重组质粒pcDNA3.1/ROP2-P30构建正确;West-ernblot显示该重组质粒在COS-7细胞中瞬时表达的产物可被重组ROP2-P30免疫兔血清识别;ELISA检测重组质粒免疫小鼠血清特异性IgG抗体水平升高;重组质粒免疫小鼠感染弓形虫后的存活时间较对照组有所延长。结论重组真核表达质粒pcDNA3.1/ROP2-P30构建成功,用该重组质粒DNA直接免疫小鼠,能够诱导产生特异的体液免疫反应,具有一定的免疫保护性;该重组质粒表达的融合抗原分子ROP2-P30具有免疫原性,可作为疫苗候选抗原深入研究。 展开更多
关键词 弓形虫 ROP2-P30 真核表达质粒 免疫效应
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弓形虫速殖子和缓殖子相互转换机制的研究进展 被引量：1
15
作者 杨培梁 彭鸿娟 陈晓光 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期240-243,共4页
关键词 弓形虫 速殖子 缓殖子 相互转换机制
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刚地弓形虫肌动蛋白profilin的原核表达和纯化
16
作者 李会敏 伊焕发 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1109-1114,共6页
目的:探讨刚地弓形虫肌动蛋白profilin(TgPRF)的原核表达体系和纯化条件,为后续的抗肿瘤免疫佐剂研究提供依据。方法:以弓形虫RH株速殖子的cDNA为模板,采用一对特定的引物扩增TgPRF基因的编码区。PCR产物双酶切后克隆入pET28a(+)载体中... 目的:探讨刚地弓形虫肌动蛋白profilin(TgPRF)的原核表达体系和纯化条件,为后续的抗肿瘤免疫佐剂研究提供依据。方法:以弓形虫RH株速殖子的cDNA为模板,采用一对特定的引物扩增TgPRF基因的编码区。PCR产物双酶切后克隆入pET28a(+)载体中。重组的pET28a(+)-TgPRF质粒转化E.coli DH5α感受态细胞。双酶切鉴定阳性克隆,并选取测序正确的质粒转化E.coli BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导表达4 h,SDS-PAGE法检测TgPRF蛋白的表达,Western blotting法检测重组蛋白His-prolilin的表达。结果:PCR扩增产物长度为492bp。经双酶切和测序,重组质粒pET28a-TgPRF连接产物构建成功。SDSPAGE检测,目的蛋白在超声菌液的上清中表达。经Ni-NTA琼脂糖凝胶柱纯化,获得纯化的TgPRF蛋白(纯度>90%)。Western blotting检测,重组TgPRF蛋白能被Anti-His抗体识别。结论:成功构建重组质粒pET28a-TgPRF,并实现可溶性原核表达。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 PROFILIN 原核表达 蛋白纯化
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弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒免疫小鼠后的免疫应答 被引量：17
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作者 郭虹 陈观今 +2 位作者 郑焕钦 周永安 吕芳丽 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期334-337,共4页
目的： 用构建的弓形虫ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 真核表达重组质粒， 直接免疫小鼠， 观察其所诱导的细胞及体液免疫反应。方法： 碱裂解法大量制备ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 质粒， 经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠， 每鼠注射１００ μ... 目的： 用构建的弓形虫ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 真核表达重组质粒， 直接免疫小鼠， 观察其所诱导的细胞及体液免疫反应。方法： 碱裂解法大量制备ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 质粒， 经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠， 每鼠注射１００ μｇ，２ ｗ ｋ 后同量加强免疫１ 次， 以ｐｃＤＮＡ３ 空质粒及生理盐水组为对照。分别于免疫后３０ ｄ、５０ ｄ、７０ ｄ 共３ 次用ＭＴＴ 法测定小鼠脾脏Ｔ 淋巴细胞增殖活性及ＮＫ 细胞活性； 用间接免疫荧光抗体法测定Ｔ淋巴细胞亚群数目；ＥＬＩＳＡ 法测定ＩｇＧ 抗体滴度。结果： 用ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 质粒免疫小鼠３０ ｄ 后， 脾脏明显增大； 免疫组脾淋巴细胞增殖活性明显高于生理盐水及空质粒对照组。ＮＫ 细胞杀伤活性３ 次的测定结果免疫组均高于对照组。Ｔ 细胞亚群， ＣＤ４＋ 细胞数与对照组相比较无明显变化， 而ＣＤ８＋ 细胞数显著增高。血清抗体ＩｇＧ７０ ｄ 内检测结果， 与对照组相比较， 无明显增高； 而免疫后９０ ｄ 检测明显增高， 抗体滴度１∶１００。结论： 用ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 重组质粒ＤＮＡ免疫小鼠， 可诱导产生细胞及体液免疫应答。 展开更多
关键词 弓形虫 棒状体蛋白1 重组质粒 DNA 免疫应答
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刚地弓形虫滑行相关蛋白45的克隆、表达与免疫反应性检测
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作者 李润花 关丽 殷国荣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期563-567,共5页
目的克隆、原核表达刚地弓形虫滑行相关蛋白45(TgGAP45)基因,检测重组蛋白rTgGAP45的免疫反应性。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。根据TgGAP45基因全长编码序列的开放阅读框设计引物,PCR扩增TgGAP45基因。扩增产物... 目的克隆、原核表达刚地弓形虫滑行相关蛋白45(TgGAP45)基因,检测重组蛋白rTgGAP45的免疫反应性。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。根据TgGAP45基因全长编码序列的开放阅读框设计引物,PCR扩增TgGAP45基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化至大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR、双酶切和测序鉴定。将重组质粒pET-30a(+)-TgGAP45转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物,分别以抗His标签抗体、人抗弓形虫血清或小鼠抗弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)鉴定重组蛋白免疫反应性。结果刚地弓形虫GAP45基因的cDNA开放式阅读框全长为738 bp,PCR扩增结果显示,在750 bp处有一条特异性扩增条带(带His标签),与预期大小相符。菌落PCR、双酶切以及测序结果均表明重组质粒pET-30a(+)-TgGAP45构建成功。SDS-PAGE结果表明,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约35000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析结果显示,诱导表达的蛋白为带His标签的重组蛋白,可分别被His标签抗体、人抗弓形虫血清和小鼠抗弓形虫STAg血清识别。结论刚地弓形虫RH株TgGAP45基因片段可在原核表达系统中高效可溶性表达,该重组蛋白rTgGAP45具有免疫反应性。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 滑行相关蛋白45 基因克隆 原核表达 免疫反应性
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IFN-γ活化小鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫作用的剂量相关性及其与TNF-α的协同作用 被引量：15
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作者 张爱民 杨惠珍 +1 位作者 杨杨 钱宗立 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期436-440,共5页
目的：揭示ＩＦＮ－γ抗弓形虫作用的剂量相关性及ＴＮＦ－α对ＩＦＮ－γ是否存在协同作用。方法：本实验体外以不同剂量ＩＦＮ－γ单独或与ＴＮＦ－α联合刺激昆明鼠腹腔巨噬细胞，观察其对入侵的ＲＨ株速殖子的作用及培养上清中ＮＯ... 目的：揭示ＩＦＮ－γ抗弓形虫作用的剂量相关性及ＴＮＦ－α对ＩＦＮ－γ是否存在协同作用。方法：本实验体外以不同剂量ＩＦＮ－γ单独或与ＴＮＦ－α联合刺激昆明鼠腹腔巨噬细胞，观察其对入侵的ＲＨ株速殖子的作用及培养上清中ＮＯ的水平。结果：随着ＩＦＮ－γ剂量的增大，巨噬细胞抗虫作用增强，培养上清中ＮＯ水平增高；虫体入侵后２４ｈＮＯ水平与细胞内虫体数呈显著负相关。结论：ＩＦＮ－γ可激活巨噬细胞抑制和杀灭入侵的弓形虫，并与剂量有关，ＴＮＦ－α对此有协同作用。 展开更多
关键词 弓形虫 Γ-干扰素 巨噬细胞 氧化氮 TNF-Α
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IL-6对弓形虫增殖的影响 被引量：3
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作者 方艳秋 谭岩 +1 位作者 张永生 李敬 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期106-108,共3页
目的：观察白细胞介素－６（ＩＬ－６）对弓形虫增殖的影响。方法：以Ｃ５７ＢＬ／６小鼠腹腔巨噬细胞为靶细胞，采用３Ｈ－尿嘧啶（３Ｈ－Ｕ）特异性标记的弓形虫在ＭΦ内的增殖实验。结果：单独应用ＩＬ－６处理ＭΦ，可以促进弓形虫... 目的：观察白细胞介素－６（ＩＬ－６）对弓形虫增殖的影响。方法：以Ｃ５７ＢＬ／６小鼠腹腔巨噬细胞为靶细胞，采用３Ｈ－尿嘧啶（３Ｈ－Ｕ）特异性标记的弓形虫在ＭΦ内的增殖实验。结果：单独应用ＩＬ－６处理ＭΦ，可以促进弓形虫在ＭΦ内的增殖，α肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）的影响不明显；而在ＩＬ－６逆转γ干扰素（ＩＦＮγ）诱导的ＭΦ抗弓形虫效应的实验中发现，加入抗ＴＮＦα抗体可增加ＩＬ－６对ＩＦＮγ诱导ＭΦ抗弓形虫效应的逆转作用。结论：体外应用ＩＬ－６可促进弓形虫在小鼠腹腔ＭΦ内的增殖作用，并能部分逆转ＩＦＮγ的抗弓形虫效应。 展开更多
关键词 弓形虫 Γ干扰素 肿瘤坏死因子 IL-6
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