人噬菌体抗体库的构建和甲肝抗体的筛选 被引量：9

1

作者 杜桂鑫 于长明 +1 位作者 毛春生 王海涛 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期49-52,共4页

目的　构建人噬菌体抗体组合文库,筛选人单克隆抗体。方法　用RTPCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于pComb3载体,电转化E.coli形成噬菌体抗体库;以固相化抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体。结果　17对免疫球蛋白引物全部能够扩增出目... 目的　构建人噬菌体抗体组合文库,筛选人单克隆抗体。方法　用RTPCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于pComb3载体,电转化E.coli形成噬菌体抗体库;以固相化抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体。结果　17对免疫球蛋白引物全部能够扩增出目的片段;经数次电转化构建了库容为693×107的抗体库,滴度为8×1014PFU/ml,Fab基因重组率为40%。以单抗捕获的甲肝抗原淘洗3轮,出现特异性富集;阳性克隆经直接ELISA和竞争抑制性ELISA实验证实具有良好的抗甲肝抗原特异性,无交叉反应性。结论　成功构建了抗体组合文库,从中获得抗甲肝抗原的特异性人抗体。 展开更多

关键词 噬菌体 抗体库

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骨形成蛋白7真核表达质粒的构建及在骨髓间充质干细胞中的表达 被引量：7

2

作者 侯树勋 孙大铭 +2 位作者 杜桂鑫 童贻刚 付小兵 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期445-448,共4页

目的　构建骨形成蛋白 7(hBMP7)基因真核表达质粒 ,并使其在骨髓间充质干细胞中表达。　方法　采用PCR技术扩增BMP7基因 ,将其插入真核表达载体pcDNA3 1中 ,利用梯度离心法分离培养骨髓间充质干细胞 (MSCs) ,然后用构建的BMP7表达质粒转... 目的　构建骨形成蛋白 7(hBMP7)基因真核表达质粒 ,并使其在骨髓间充质干细胞中表达。　方法　采用PCR技术扩增BMP7基因 ,将其插入真核表达载体pcDNA3 1中 ,利用梯度离心法分离培养骨髓间充质干细胞 (MSCs) ,然后用构建的BMP7表达质粒转染MSCs,使其得到表达。结果　经过PCR及酶切鉴定证明获得了BMP7真核表达质粒pcDNA BMP7,通过反转录PCR和免疫组化鉴定证明BMP7在转染后的骨髓间充质干细胞中得到了表达。　结论　BMP7真核表达质粒的构建和在骨髓间充质干细胞中的表达 ,为BMP7基因治疗的研究奠定了坚实的基础 ,同时也为组织工程成骨和成软骨的研究提供了改良的种子细胞。 展开更多

关键词 骨形成蛋白7 真核表达 质粒 构建 骨髓间充质干细胞 基因转染

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人PBM C中IL-18基因的克隆及在E.coli中的高效表达与纯化 被引量：5

3

作者 杜勇 汪涛 +3 位作者 杜桂鑫 徐静 侯利华 王海涛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期226-228,共3页

从一名丙型肝炎病人的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中分别克隆了前体和成熟人白细胞介素－１８（ｈＩＬ－１８）的基因，并应用大肠杆菌表达系统（ｐＱＥ－３０），成功地表达了重组ｈＩＬ－１８的前体和成熟蛋白。从人ＰＢＭＣ中提取... 从一名丙型肝炎病人的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中分别克隆了前体和成熟人白细胞介素－１８（ｈＩＬ－１８）的基因，并应用大肠杆菌表达系统（ｐＱＥ－３０），成功地表达了重组ｈＩＬ－１８的前体和成熟蛋白。从人ＰＢＭＣ中提取总ＲＮＡ，用ｐｏｌｙ（Ｔ）８－１２反转录成ｃＤＮＡ，再以ＰＣＲ扩增出特异ＤＮＡ 片段。利用Ｅ．ｃｏｌｉ表达载体ｐＱＥ－３０，构建分别表达ｈＩＬ－１８前体和成熟蛋白的的重组质粒ｐＱＥＩＬ１８ｐ 和ｐＱＥＩＬ１８ｍ ，转化Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５后，经ＩＰＴＧ诱导，表达出相对分子质量分别为２４ＫＤ和１９ＫＤ的重组蛋白，表达量占菌体蛋白的３０％ 和３５％ 。序列测定证实，ｈＩＬ－１８前体蛋白基因长５８２ｂｐ，成熟蛋白基因长４７７ｂｐ。经金属螯合层析纯化，获得了高纯度的表达蛋白。生物学活性鉴定，重组成熟蛋白能显著刺激Ｃｏｎ 展开更多

关键词 PBMC 重组 表达 纯化 单核细胞 白细胞介素18

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骨形成蛋白7重组腺病毒的构建及转染骨髓间充质干细胞的研究 被引量：6

4

作者 孙大铭 侯树勋 +2 位作者 杜桂鑫 童贻刚 付小兵 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期436-438,共3页

目的　构建骨形成蛋白 (BMP) 7重组腺病毒 ,使其转染骨髓间充质干细胞并在细胞内得到表达。方法　将BMP7基因克隆到转移载体 pAdTrack CMV中 ,在细菌BJ5 183中与pAdEasy腺病毒基因组进行同源重组 ,得到BMP7重组腺病毒基因组 ,通过转染HE... 目的　构建骨形成蛋白 (BMP) 7重组腺病毒 ,使其转染骨髓间充质干细胞并在细胞内得到表达。方法　将BMP7基因克隆到转移载体 pAdTrack CMV中 ,在细菌BJ5 183中与pAdEasy腺病毒基因组进行同源重组 ,得到BMP7重组腺病毒基因组 ,通过转染HEK2 93细胞包装出重组腺病毒。利用BMP7重组腺病毒转染分离纯化后的骨髓间充质干细胞 ,鉴定BMP7在细胞内的表达。结果　经过多聚酶链反应 (PCR)及酶切鉴定证明获得了BMP7转移质粒pAdTrack BMP7和BMP7重组腺病毒基因组 ,并包装出重组腺病毒。逆转录PCR和免疫组织化学证明BMP7在重组腺病毒转染后的骨髓间充质干细胞中得到了表达。结论　BMP7重组腺病毒的构建和在骨髓间充质干细胞中的表达 ,为BMP7基因治疗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 骨形成蛋白7 腺病毒 构建 转染 骨髓问充质干细胞

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hIL-16 cDNA的克隆、测序及在E.coli中的表达与纯化研究 被引量：5

5

作者 杜勇 杜桂鑫 +2 位作者 侯利华 汪涛 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第1期25-27,共3页

在国内首次从人的外周血单个核细胞（PBMC）中克隆了人白细胞介素—16（hIL－16）cDNA，并应用一种新型的大肠杆菌表达系统一硫氧还蛋白表达系统，成功地表达了重组hIL-16。hIL-16cDNA的扩增：从人PBMC中提取总RNA，poly（T）8-12反转录... 在国内首次从人的外周血单个核细胞（PBMC）中克隆了人白细胞介素—16（hIL－16）cDNA，并应用一种新型的大肠杆菌表达系统一硫氧还蛋白表达系统，成功地表达了重组hIL-16。hIL-16cDNA的扩增：从人PBMC中提取总RNA，poly（T）8-12反转录cDNA，以半巢式PCR扩增出特异的DNA片段。hIL-16cDNA的克隆、测序与表达：利用E．coli表达载体pTrxFus，构建hIL－16。DNA的重组质粒，转化E．coli后，经色氨酸诱导，表达出相对分子质量（Mr）为30000的可溶性融合蛋白，表达量占菌体蛋白的30％。序列测定证实，此片段长393bp，确为hIL-16cDNA。经一步渗透压休克，即获得了高纯度的表达蛋白。 展开更多

关键词 hIL-16 CDNA 克隆 测序 大肠杆菌 表达 纯化

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抗人整合素ανβ_3单链抗体的构建和表达 被引量：3

6

作者 王臣 侯利华 +6 位作者 张彦明 李建民 廖振林 杜桂鑫 陈薇 孙启鸿 童贻刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期159-162,共4页

目的 :利用基因工程抗体技术构建抗人整合素ανβ3 单链抗体(scFv)。方法 :从分泌抗人整合素ανβ3 单抗 (mAb)的杂交瘤细胞E10总RNA中 ,用RT PCR扩增VH 和VL 基因 ,对其核苷酸序列分析后 ,通过PCR在VH 和VL 基因间插入柔性连接子(Gly... 目的 :利用基因工程抗体技术构建抗人整合素ανβ3 单链抗体(scFv)。方法 :从分泌抗人整合素ανβ3 单抗 (mAb)的杂交瘤细胞E10总RNA中 ,用RT PCR扩增VH 和VL 基因 ,对其核苷酸序列分析后 ,通过PCR在VH 和VL 基因间插入柔性连接子(Gly4Ser) 3,组装成scFv基因 ,并克隆至原核表达载体pTIG TRX中。以重组子转化大肠杆菌BL2 1(DE3 )诱导目的基因表达。结果 :转化菌可表达相对分子质量 (Mr)为 3 10 0 0的scFv。Westernblot证实 ,具有His6标签蛋白的表达。经低剂量的IPTG诱导和较低温度培养 ,scFv获得了可溶性形式表达。表达产物经Ni NTA琼脂糖层析纯化后纯度达 91%以上。ELISA鉴定证实 ,scFv具有良好的抗原结合活性。结论 :成功地构建并表达抗人整合素ανβ3 的scFv ,为进一步临床研究奠定了基础。 展开更多

关键词 单链抗体 整合素αυβ3 构建 表达

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应用随机PCR方法鉴定一株肠道病毒 被引量：3

7

作者 杜桂鑫 潘文胜 +1 位作者 陈万荣 王海涛 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期242-244,共3页

目的　从基因水平对一肠道病毒分离株进行分析鉴定。方法　提取病毒RNA ,以锚定随机引物反转录合成双链cDNA ,用锚定特异引物进行随机扩增 ,扩增产物进行克隆、测序和序列分析。结果　随机扩增的病毒基因在电泳上呈典型的smear带型 ;11... 目的　从基因水平对一肠道病毒分离株进行分析鉴定。方法　提取病毒RNA ,以锚定随机引物反转录合成双链cDNA ,用锚定特异引物进行随机扩增 ,扩增产物进行克隆、测序和序列分析。结果　随机扩增的病毒基因在电泳上呈典型的smear带型 ;11个随机克隆经GenBank检索 ,与肠道病毒成员具有最高的同源性且同源率超过 80 % ;11个克隆随机分布于病毒的基因组中 ,排定后的序列形成 4个毗连序列群 ,共计 2 2 61个碱基 ,涵盖病毒基因组的 30 % ;部分序列与柯萨奇病毒B6型氨基酸同源率达 97 3% ;参照测定序列合成的引物能够特异性地扩增病毒基因。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 肠病毒 基因 鉴定

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丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶特异性结合肽的筛选和鉴定 被引量：1

8

作者 杜桂鑫 侯利华 +2 位作者 陈万荣 张永国 王海涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期298-304,共7页

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶在病毒复制和包装中的重要作用使其成为特异性抗病毒药物研究的首选靶标。根据丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,用柔性连接子连接NS3丝氨酸蛋白酶结构域和NS4A的核心序列 ,构建成单链丝氨酸蛋白酶基因并且在大肠杆... 丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶在病毒复制和包装中的重要作用使其成为特异性抗病毒药物研究的首选靶标。根据丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,用柔性连接子连接NS3丝氨酸蛋白酶结构域和NS4A的核心序列 ,构建成单链丝氨酸蛋白酶基因并且在大肠杆菌中获得高水平的可溶性表达 ,纯化后的目的蛋白能够切割重组蛋白底物NS5ab。随后 ,以单链丝氨酸蛋白酶为靶分子对噬菌体展示的随机十二肽库进行了三轮淘筛 ,挑选的 44个克隆中有 3 7个克隆能够特异性地结合丝氨酸蛋白酶 ,并且这种结合作用为竞争性ELISA试验结果所支持。对 1 3个克隆进行序列测定 ,得到 6种序列 ,它们在氨基酸组成上存在明显偏性 ,富含组氨酸和色氨酸 ,缺乏酸性氨基酸 ; 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 丝氨酸蛋白酶 特异性结合肽 筛选 鉴定 噬菌体展示 肽库

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噬菌体抗体库技术研究进展 被引量：3

9

作者 杜桂鑫 王海涛 《国外医学（免疫学分册）》 1999年第6期350-354,共5页

噬菌体抗体组合文库技术作为噬菌体展示和抗体组合文库两种技术的集成，自１９９０ 年建立以来，经过不断发展，目前被广泛用于生物医学的许多领域。本文主要就近年来该技术在抗体基因扩增、载体构建、筛选方法和亲和力成熟等方面的进... 噬菌体抗体组合文库技术作为噬菌体展示和抗体组合文库两种技术的集成，自１９９０ 年建立以来，经过不断发展，目前被广泛用于生物医学的许多领域。本文主要就近年来该技术在抗体基因扩增、载体构建、筛选方法和亲和力成熟等方面的进展进行综述。 展开更多

关键词 噬菌体 抗体库 载体

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人源抗HAV噬菌体抗体的筛选及基因序列分析 被引量：2

10

作者 于长明 杜桂鑫 +3 位作者 毛春生 宋宏彬 徐志凯 王海涛 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 1999年第3期162-164,共3页

目的获得人源性甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）抗体。方法应用抗体捕获的ＨＡＶ，从本实验室构建的噬菌体抗体组合文库中筛选与ＨＡＶ病毒有结台活性的人源噬菌体抗体（Ｆａｂ段），用夹心ＥＬＩＳＡ和竞争抑制实验测定其活性及特异性。结果筛... 目的获得人源性甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）抗体。方法应用抗体捕获的ＨＡＶ，从本实验室构建的噬菌体抗体组合文库中筛选与ＨＡＶ病毒有结台活性的人源噬菌体抗体（Ｆａｂ段），用夹心ＥＬＩＳＡ和竞争抑制实验测定其活性及特异性。结果筛选出与ＨＡＶ病毒有结台活性和特异性的人源抗体。序列分析表明重链基因为ＩｇＧＩ亚类，可变区属ＶＨＩ亚群，是ＤＰ８８、Ｄ３—３和ＪＨＳ胚系基因片段的重排产物；轻链基因属ＶＸｌｌｌ亚群，是ＤＰＸ２２和Ｊｋ４胚系基因的重排产物。结论应用抗体捕获抗原的方法，能从该抗体库筛选出ＨＡＶ抗体，也说明该抗体库的构建是成功的。 展开更多

关键词 甲型肝炎病毒 抗体 噬菌体 序列分析 HAV

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丙型肝炎病毒NS5ab区的B细胞模拟表位的确认 被引量：2

11

作者 侯利华 杜桂鑫 王海涛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期265-268,273,共5页

目的　用噬菌体展示随机肽库研究丙型肝炎病毒 (HCV)NS5ab区的B细胞表位。方法　在原核系统中表达了HCVNS5ab重组蛋白 ,亲和层析纯化血清中抗HCVNS5ab的特异多抗 ,用此多抗来筛选噬菌体递呈随机 12肽库 ,获得HCVNS5ab区的B细胞表位。结... 目的　用噬菌体展示随机肽库研究丙型肝炎病毒 (HCV)NS5ab区的B细胞表位。方法　在原核系统中表达了HCVNS5ab重组蛋白 ,亲和层析纯化血清中抗HCVNS5ab的特异多抗 ,用此多抗来筛选噬菌体递呈随机 12肽库 ,获得HCVNS5ab区的B细胞表位。结果　成功地表达了HCVNS5ab重组蛋白 ,用此蛋白检验了 130份HCV阳性血清 ,阳性率为 36 %。在筛选的噬菌体展示随机肽库后 ,挑取 13个阳性克隆测序 ,有 9个序列不同 ,最终通过噬菌体表位表达的方法确认了 3个表位。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 NS5ab区 B细胞模拟表位 噬菌体展示随机肽库

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抗人整合素ανβ_3 单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体的构建和表达 被引量：3

12

作者 王臣 侯利华 +5 位作者 张彦明 李建民 廖振林 杜桂鑫 陈薇 童贻刚 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第5期9-13,共5页

　为构建抗人整合素ανβ3单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面表达,采用PCR方法从整合素ανβ3单抗E10ScFv载体中,扩增重链可变区VH和轻链可变区VL基因。将VH基因与人重链恒定区CH1基因连接,VL基因与人CK基因连接... 　为构建抗人整合素ανβ3单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面表达,采用PCR方法从整合素ανβ3单抗E10ScFv载体中,扩增重链可变区VH和轻链可变区VL基因。将VH基因与人重链恒定区CH1基因连接,VL基因与人CK基因连接,分别构建了鼠/人嵌合重链FD基因和轻链基因,将其克隆入pComb3,构建了鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,用辅助噬菌体VCSM13超感染,间接ELISA及竞争抑制ELISA检测鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体活性。结果成功构建了鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面展示了可结合人整合素ανβ3抗原的鼠/人嵌合Fab抗体。 展开更多

关键词 整合素ΑΝΒ3 噬菌体展示 PCR 肿瘤血管形成 细胞粘附分子 鼠/人嵌合Fab抗体

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丙型肝炎病毒NS3蛋白酶结构域在昆虫细胞中的表达及鉴定 被引量：1

13

作者 杜桂鑫 侯利华 王海涛 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期10-13,共4页

目的　利用杆状病毒 昆虫细胞表达系统制备丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶结构域 (proteasedomain)的重组蛋白。方法　构建含有HCV丝氨酸蛋白酶结构域基因的杆状病毒转移载体 pFBCNS3N ,转化大肠杆菌DH10Bac进行转座 ,提取重组Bacmid... 目的　利用杆状病毒 昆虫细胞表达系统制备丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶结构域 (proteasedomain)的重组蛋白。方法　构建含有HCV丝氨酸蛋白酶结构域基因的杆状病毒转移载体 pFBCNS3N ,转化大肠杆菌DH10Bac进行转座 ,提取重组Bacmid用Lipofectamine法转染昆虫细胞Sf9包装成重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染昆虫细胞进行蛋白表达 ,用SDS PAGE电泳和免疫印迹实验分析表达情况 ;利用去垢剂十二烷基肌酸钠溶解重组蛋白后以Ni NTAagrose柱亲和纯化重组蛋白 ;以重组蛋白NS5ab(包含NS5A羟基端部分和NS5B氨基端部分的重组蛋白 )为底物检测丝氨酸蛋白酶的酶切活性 ;以间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性。结果　HCV丝氨酸蛋白酶结构域基因在昆虫细胞中获得高水平表达 ;重组蛋白能够部分溶解于含有去垢剂十二烷基肌酸钠的缓冲液 ;从 5× 10 7细胞中总共获得 0 .2mg重组蛋白 ,纯度大于 90 %;重组丝氨酸蛋白酶能够将NS5ab切割成两个片段 ;血清学实验证实该蛋白抗原性很好。结论　昆虫细胞表达的HCV丝氨酸蛋白酶结构域为膜结合型蛋白 ,具有良好的酶学活性以及抗原性。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 丝氨酸蛋白酶 昆虫细胞 去垢剂

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抗甲型肝炎病毒抗体Fab在大肠杆菌中的表达 被引量：3

14

作者 于长明 宋宏彬 +3 位作者 杜桂鑫 徐静 徐志凯 王海涛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期149-152,共4页

目的在大肠杆菌中高效表达人源抗HAV抗体Fab，为进一步研究该抗体的功能奠定基础。方法依次将抗HAV抗体的Fd及轻链基因克隆到表达载体pASK84的不同信号序列下，构建成Fab表达质粒，在大肠杆菌JM83中进行表达，并对表达产物进行复性。用S... 目的在大肠杆菌中高效表达人源抗HAV抗体Fab，为进一步研究该抗体的功能奠定基础。方法依次将抗HAV抗体的Fd及轻链基因克隆到表达载体pASK84的不同信号序列下，构建成Fab表达质粒，在大肠杆菌JM83中进行表达，并对表达产物进行复性。用SDS-PAGE、western blot和ELISA法检测Fab的表达及其与甲肝病毒抗原的结合活性。结果 构建了抗HAV Fab的重组表达质粒p84Fab，在大肠杆菌JM83中获得表达，表达的Fab占全菌的25%，主要以包涵体形式存在，复性后具有抗原结合活性；培养基、菌体可溶性蛋白部分也能检测到有抗原结合活性的Fab。 结论抗HAV抗体Fab在大肠杆菌中得到了表达，并具有良好的抗原结合活性。 展开更多

关键词 甲型肝炎病毒 FAB 基因表达 HAV抗体 大肠杆菌 抗原结合活性

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中国人杀菌蛋白氨基端基因的克隆和序列分析 被引量：3

15

作者 陈薇 黄策 +4 位作者 王海涛 傅玲 俞晓峰 徐静 杜桂鑫 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期350-353,共4页

　本文报道中国人杀菌蛋白（BPI）氨基端基因CDNA的克隆及序列测定。采用逆转录PCR方法，分别从HL-60细胞和正常人外周血、HGVRNA阳性献血员外周血的淋巴细胞中克隆了人BPI氨基端基因BG60、BGNor和BGHGV。序列分析结果表明：BG60与文献... 　本文报道中国人杀菌蛋白（BPI）氨基端基因CDNA的克隆及序列测定。采用逆转录PCR方法，分别从HL-60细胞和正常人外周血、HGVRNA阳性献血员外周血的淋巴细胞中克隆了人BPI氨基端基因BG60、BGNor和BGHGV。序列分析结果表明：BG60与文献报道一致：BGNor有3个核苷酸差异，推导有1个氨基酸变化；BGHGV有3个核苷酸差异，其中一处与BGNor相同，推导有2个氨基酸变化。由此推测中国人BPI氨基端基因可能具有特殊性。 展开更多

关键词 人杀菌蛋白 免疫学 序列分析 氨基端基因 克隆

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昆明地铁环境空气质量检测分析 被引量：4

16

作者 韩新宇 陈缘奇 +3 位作者 邓昊 史建武 卢秀青 杜桂鑫 《云南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1023-1029,共7页

2014年7月,利用便携监测设备检测了昆明31个地铁站台及车厢内环境空气质量,对空气中砷化氢(As H3)、氨(NH3)、总挥发性有机物(TVOCs)、一氧化氮(NO)、二氧化氮(NO2)进行了检测分析.结果表明:(1)在高架站台(斗南站)与地下站台(东风广场站... 2014年7月,利用便携监测设备检测了昆明31个地铁站台及车厢内环境空气质量,对空气中砷化氢(As H3)、氨(NH3)、总挥发性有机物(TVOCs)、一氧化氮(NO)、二氧化氮(NO2)进行了检测分析.结果表明:(1)在高架站台(斗南站)与地下站台(东风广场站)气态污染物浓度的对比中,高架站台中As H2、NH3、NO、NO2的质量浓度分别为(117.25±1.94)、(53.93±7.30)、(395.66±5.13)、(89.77±17.82)μg·m-3,且TVOCs体积分数为(63.59±3.61)×10-9,而地下站台5种气态污染物质量浓度分别为(112.21±1.94)、(119.63±3.06)、(398.20±4.62)、(54.23±2.54)μg·m-3和(103.39±3.88)×10-9(体积分数),高架站台中As H3、NH3质量浓度和TVOCs体积分数比地下站台高,而NOx质量浓度高架站台比地下站台低;(2)在站台与车厢内气态污染物浓度的对比中,站台中As H3、NH3、NO、NO2的质量浓度分别为(116.27±1.19)、(106.92±5.50)、(397.71±3.83)、(61.11±4.58)μg·m-3,且TVOCs的体积分数为(95.68±4.29)×10-9,车厢中5种气态污染物的质量浓度分别为(119.63±1.22)、(120.53±2.97)、(384.53±2.71)、(78.83±3.36)μg·m-3和(113.83±4.08)×10-9(体积分数),其中站台的As H3、NH3及TVOCs浓度均明显低于车厢内浓度,而NOx两者相似;(3)在对31个站的监测中发现,As H3在31个站中质量浓度水平相差不大,其中东风广场站的As H3质量浓度最高,为126.81μg·m-3,NH3质量浓度和TVOCs体积分数在环城南路站最高,分别为145.26μg·m-3和155.73×10-9,NOx质量浓度在南部客运站最高,其中NO2质量浓度为158.21μg·m-3.本研究中发现,As H3、NH3和TVOCs浓度变化主要受客流量影响较大,NO、NO2的质量浓度变化主要受地面汽车尾气排放的影响. 展开更多

关键词 地铁 空气质量 砷化氢 氨 总挥发性有机物 氮氧化物 车厢内 站台

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表位水平研究病毒流行病学的方法探讨 被引量：2

17

作者 来大志 杜勇 +2 位作者 杜桂鑫 陈薇 王海涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期331-334,共4页

应用噬菌体随机展示肽库和硫氧还蛋白表面展示技术 ,建立了在表位水平研究病毒流行病学的方法 ,并以丙型肝炎病毒核心区蛋白做了初步验证 。

关键词 表位 流行病学 肽库 噬菌体 硫氧还蛋白 表面展示 HCV

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TGF-β_1成熟肽基因克隆及在大肠杆菌中表达 被引量：1

18

作者 孙大铭 侯树勋 +2 位作者 杜桂鑫 童贻刚 付小兵 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期434-436,共3页

为在原核细胞中表达TGF β1单体蛋白 ,用基因重组技术构建pBV2 2 0 TGF β和 pQE TGF β两种原核表达载体 ,分别在M15和DH5α大肠杆菌中进行表达 ,然后利用SephacrylS 10 0凝胶层析及Ni+ NTA琼脂柱纯化TGF β1单体。经酶切鉴定及测序... 为在原核细胞中表达TGF β1单体蛋白 ,用基因重组技术构建pBV2 2 0 TGF β和 pQE TGF β两种原核表达载体 ,分别在M15和DH5α大肠杆菌中进行表达 ,然后利用SephacrylS 10 0凝胶层析及Ni+ NTA琼脂柱纯化TGF β1单体。经酶切鉴定及测序结果证明pBV2 2 0和pQE30载体上成功地插入了TGF β1成熟肽基因片段。pBV2 2 0 TGF β和pQE TGF β两种原核表达载体在大肠杆菌中均得到了高效表达 ,表达量约占全菌蛋白的 15 %和 2 0 % ,表达的TGF β1单体蛋白经纯化后进行SDS PAGE电泳 ,均显示了一条蛋白带 ,分子量分别为 13kD和 15kD左右。 展开更多

关键词 转化生长因子Β 基因重排 基因表达 质粒 大肠杆菌

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轻链替换提高抗HBsAg噬菌体抗体的结合力 被引量：1

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作者 毛春生 宋宏彬 +3 位作者 李季枝 杜桂鑫 陈薇 王海涛 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 1999年第1期36-38,共3页

通过轻链替换，提高抗ＨＢＳＡｄｅ菌体抗体的结合力。方法将ＰＣＲ扩增的人抗体轻链基因，插至已克隆有人源抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体重链Ｆｄ基因的噬菌粒中，构建成轻链替换文库，通过亲和淘洗，筛选与Ｆｄ相匹配的轻链基因... 通过轻链替换，提高抗ＨＢＳＡｄｅ菌体抗体的结合力。方法将ＰＣＲ扩增的人抗体轻链基因，插至已克隆有人源抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体重链Ｆｄ基因的噬菌粒中，构建成轻链替换文库，通过亲和淘洗，筛选与Ｆｄ相匹配的轻链基因。结果经亲和淘洗后，筛选出了与Ｆｄ相匹配的轻链基因，链替换后，噬菌体抗体（ＰｈＡｂ）的ＥＬＩＳＡ光吸收值（Ａ）从０．４３±０．０９提高到最高为１．２４±０．１０。抑制实验证实所筛选出来的ｎｈａｂ具有抗ＨＢｓＡｚ的特异性。分析了ＥＬＩＳＡ光吸收值（Ａ）最高的５株噬菌体抗体的轻链基因序列，结果表明，３株ｋ链的碱基序列一致，属ＶｋⅢ亚群；２株链的基因序列相同，均属ＶＩ亚群。结论结果表明经链替换的噬菌体抗体结合力得到了较大提高，并具有与ＨＢｓＡｇ合的特异性。 展开更多

关键词 噬菌体 乙肝表面抗原 抗体亲和力 链替换

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pQE-TGF-β1原核表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达

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作者 孙大铭 侯树勋 +2 位作者 张春莉 杜桂鑫 付小兵 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 2003年第21期1490-1492,共3页

目的 :为了解人的TGF β1基因的功能及生物学活性 ,制备具有生物学活性的TGF β蛋白。方法 :用基因重组技术构建pQE30 TGF β1原核表达载体 ,并在M1 5大肠杆菌中进行表达 ,利用Ni NTA琼脂柱纯化TGF β1单体 ,通过复性得到双体蛋白 ,利... 目的 :为了解人的TGF β1基因的功能及生物学活性 ,制备具有生物学活性的TGF β蛋白。方法 :用基因重组技术构建pQE30 TGF β1原核表达载体 ,并在M1 5大肠杆菌中进行表达 ,利用Ni NTA琼脂柱纯化TGF β1单体 ,通过复性得到双体蛋白 ,利用MTT方法对复性的蛋白进行活性测定。结果 :经酶切鉴定及测序结果证明 pQE30载体上成功地插入了TGF β1成熟肽基因片段。pQE30 TGF β1原核表达载体在大肠杆菌中得到了高效表达 ,表达量约占全菌蛋白的 2 0 % ,表达得TGF β1单体蛋白经纯化后进行SDS PAGE电泳显示均得到了一条蛋白带 ,分子量为 1 5KD左右。MTT测活证明TGF β1单体蛋白经复性后具有良好的活性。结论 :pQE30 TGF β1原核表达载体的构建及重组TGF β1蛋白的制备 ,为深入了解TGF β1的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 TGF-Β1基因 原核表达质粒 大肠杆菌 生物学活性 基因重组 MTT法 融合蛋白 骨损伤修复

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