变性高效液相色谱高通量检测动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌 被引量：18

1

作者 曹际娟 徐君怡 +4 位作者 孙哲平 郑慧芳 裴轶君 赵昕 郑秋月 《饲料工业》 2008年第14期50-53,共4页

曹际娟徐君怡孙哲平郑慧芳裴轶君赵昕郑秋月摘要应用复合PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,通过通用增菌培养,建立动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌的快速高通量检测方法。根据沙门氏菌和志贺氏菌特异基因序列分别设计特异性引物,复... 曹际娟徐君怡孙哲平郑慧芳裴轶君赵昕郑秋月摘要应用复合PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,通过通用增菌培养,建立动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌的快速高通量检测方法。根据沙门氏菌和志贺氏菌特异基因序列分别设计特异性引物,复合PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以49株参考菌株做特异性试验,并开展了精密度检测试验。试验结果表明,该方法具有很好的特异性和精密度,经通用增菌和复合PCR-DHPLC技术可同时检测饲料中的沙门氏菌和志贺氏菌。该方法可以快速、准确、高通量检测,是动物源性饲料中致病菌高通量检测的新技术。 展开更多

关键词 DHPLC 动物源性饲料 通用增菌 沙门氏菌 志贺氏菌

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变性高效液相色谱检测食品中致泻性大肠杆菌 被引量：17

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作者 徐君怡 曹际娟 +2 位作者 郑秋月 赵昕 闫平平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1526-1531,共6页

【目的】应用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中致泻性大肠杆菌的快速检测方法。【方法】分别根据4种致泻性大肠杆菌的特... 【目的】应用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中致泻性大肠杆菌的快速检测方法。【方法】分别根据4种致泻性大肠杆菌的特异性毒力因子基因序列设计引物,PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。以肠产毒性大肠杆菌等32株试验菌株做特异性检测;4种致泻性大肠杆菌标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。【结果】试验结果表明该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到:肠产毒性大肠杆菌27CFU/mL、肠致病性大肠杆菌33CFU/mL、肠出血性大肠杆菌25CFU/mL、肠侵袭性大肠杆菌42CFU/mL。【结论】该方法可以快速、准确地检测食品中的致泻性大肠杆菌,是食品中病原菌检测的新技术和新方法。 展开更多

关键词 致泻性大肠杆菌 多聚酶链式反应 PCR 变性高效液相色谱 DHPLC

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变性高效液相色谱检测沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌 被引量：11

3

作者 徐君怡 曹际娟 +2 位作者 郑秋月 刘淑艳 徐杨 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期127-131,共5页

应用多重PCR反应(multiplex PCR,mPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquidchromatography,DHPLC)技术建立食品中沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速检测方法。以编码沙门氏菌的fimY基因、编码... 应用多重PCR反应(multiplex PCR,mPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquidchromatography,DHPLC)技术建立食品中沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速检测方法。以编码沙门氏菌的fimY基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码肠出血性大肠杆菌O157:H7的rfbE基因为靶基因,选择3对引物,建立并优化了快速鉴别沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7的多重PCR体系,扩增产物分别为284、159和499 bp,并验证了该多重PCR具有特异性。沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。试验结果表明该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到:沙门氏菌1.5 CFU/ml、空肠弯曲菌15 CFU/ml、肠出血性大肠杆菌O157:H7 15 CFU/ml。在随机采集的226份冷冻鸡肉类样品中,检出了7份样品为沙门氏菌阳性、10份为空肠弯曲菌阳性、1份为肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性。研究建立的多重PCR-DHPLC方法可特异、灵敏地实现对沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速检测。 展开更多

关键词 沙门氏菌 空肠弯曲菌 肠出血性大肠杆菌O157:H7 变性高效液相色谱

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单核细胞增生李斯特氏菌PCR-DHPLC检测新技术的建立 被引量：10

4

作者 曹际娟 闫平平 +3 位作者 徐君怡 郑秋月 马惠蕊 谢明杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期415-419,共5页

应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌fimY的快速检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌prfA和hlyA基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以单核细胞增生李斯特氏菌... 应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌fimY的快速检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌prfA和hlyA基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以单核细胞增生李斯特氏菌等61株参考菌株做特异性试验;单核细胞增生李斯特氏菌菌株稀释成不同梯度,进行灵敏度试验。试验结果表明该方法具有很好的特异性,灵敏度较高,检测低限可达到为181CFU/ml。可以快速、准确检测单核细胞增生李斯特氏菌,是食品中致病菌快速检测的新技术。 展开更多

关键词 DHPLC 单核细胞增生李斯特氏菌 fimY基因

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PCR结合变性高效液相色谱快速检测水产品中河流弧菌 被引量：9

5

作者 曹际娟 赵昕 +3 位作者 孙哲平 于珂 徐君怡 郑秋月 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第11期2187-2189,共3页

目的:应用PCR结合变性高效液相色谱技术实现水产品中河流弧菌的快速鉴定。方法:利用河流弧菌的toxR基因序列设计引物,并对该方法进行特异性、精密度和实际应用等方面的考察。结果:用该方法未检测到河流弧菌的近源种及其他细菌的阳性吸收... 目的:应用PCR结合变性高效液相色谱技术实现水产品中河流弧菌的快速鉴定。方法:利用河流弧菌的toxR基因序列设计引物,并对该方法进行特异性、精密度和实际应用等方面的考察。结果:用该方法未检测到河流弧菌的近源种及其他细菌的阳性吸收峰,表现出了很好的特异性。结论:用PCR结合变性高效液相色谱检测河流弧菌,不仅特异性好、灵敏度高,且方法简便、快速。 展开更多

关键词 PCR—DHPLC 河流弧菌 toxR基因 检测

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黄海繁茂膜海绵中微生物多样性的研究 被引量：6

6

作者 徐君怡 靳艳 +2 位作者 虞星炬 金美芳 张卫 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期576-579,共4页

构建了中国黄海繁茂膜海绵中细菌 16SrDNA克隆 ,对其遗传多样性进行了分析 ,发现海绵中相关细菌 16SrDNA基因主要归类于紫硫细菌门 (Proteobacteria)中的α_亚门、γ_亚门 ,和放线菌门 (Actinobacteria)等类群。所获得的16SrDNA序列与Ge... 构建了中国黄海繁茂膜海绵中细菌 16SrDNA克隆 ,对其遗传多样性进行了分析 ,发现海绵中相关细菌 16SrDNA基因主要归类于紫硫细菌门 (Proteobacteria)中的α_亚门、γ_亚门 ,和放线菌门 (Actinobacteria)等类群。所获得的16SrDNA序列与GenBank中的已知序列差异较大 ,反映出该海绵存在尚未发现的微生物新信息。 展开更多

关键词 黄海 繁茂膜海绵 16S RDNA序列 多样性

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实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系 被引量：7

7

作者 曹际娟 徐君怡 +3 位作者 曹冬梅 张丕桥 栾凤侠 刘洋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期156-159,共4页

目的:建立实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系的鉴定方法。方法:以转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2为研究对象,在转基因小麦外源片段与小麦染色体重组的边界序列分别设计引物和探针,以其他... 目的:建立实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系的鉴定方法。方法:以转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2为研究对象,在转基因小麦外源片段与小麦染色体重组的边界序列分别设计引物和探针,以其他多种转基因产品和非转基因小麦为对照进行特异性实验,以B73-6-1样品模拟制备10个含量梯度的添加样品进行灵敏度实验。结果:本研究设计的引物和探针具有很好的品系鉴定特异性,检测灵敏度可达到0.01%(m/m)。结论:该方法特异性好、灵敏度高,可快速、准确地鉴定转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系。 展开更多

关键词 转基因小麦 B73-6-1 B72-8-11b B102-1-2 品系鉴定 实时荧光聚合酶链式反应

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水产品中溶藻弧菌PCR-变性高效液相色谱检测方法的建立 被引量：7

8

作者 郑秋月 曹际娟 +3 位作者 王秋艳 徐君怡 徐杨 傅俊范 《水产科学》 CAS 北大核心 2009年第3期136-138,共3页

采用DHPLC技术检测溶藻弧菌特异性PCR扩增产物,优化分析条件,探讨其灵敏度特异性,并与传统检测方法进行了比较。试验结果表明,该方法有很好的特异性,灵敏度较高。得到溶藻弧菌PCR-DHPLC特征峰型图,样本检测的峰型图可用于定性或定量监... 采用DHPLC技术检测溶藻弧菌特异性PCR扩增产物,优化分析条件,探讨其灵敏度特异性,并与传统检测方法进行了比较。试验结果表明,该方法有很好的特异性,灵敏度较高。得到溶藻弧菌PCR-DHPLC特征峰型图,样本检测的峰型图可用于定性或定量监测样本中溶藻弧菌的动态变化。建立的水产品中溶藻弧菌PCR-DHPLC方法具有广泛而良好的适用性。 展开更多

关键词 溶藻弧菌 聚合酶链式反应 变性高效液相色谱

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多重PCR-变性高效液相色谱检测食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌 被引量：6

9

作者 徐君怡 曹际娟 +2 位作者 郑秋月 裴轶君 于珂 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期207-212,共6页

本研究应用多重PCR反应(mPCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测方法。以编码嗜热弯曲菌属的16S rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码结肠弯曲菌的cdt基因为靶基因,选择3对引物,建立并... 本研究应用多重PCR反应(mPCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测方法。以编码嗜热弯曲菌属的16S rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码结肠弯曲菌的cdt基因为靶基因,选择3对引物,建立并优化了鉴别空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的mPCR体系,扩增产物分别为287bp、159bp和173bp。采用22株细菌验证了该mPCR具有特异性。mPCR检测的灵敏度在DNA水平上达到空肠弯曲菌10pg/μL、结肠弯曲菌1pg/μL;在人工模拟污染样品起始污染浓度为1.5个/mL时,42℃微需氧条件下培养24h即可被检出。在随机采集的172份冷冻鸡肉类样品中,检出了18份样品为空肠弯曲菌阳性,7份样品为结肠弯曲菌阳性。本研究建立的mPCR-DHPLC方法可特异、灵敏地实现对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重PCR 变性高效液相色谱

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虎制品的SYB RGreen Ⅰ实时荧光PCR特异性鉴定 被引量：6

10

作者 徐君怡 曹际娟 +1 位作者 王长文 王秋艳 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期82-84,共3页

针对虎线粒体细胞色素b(Cyt b)基因设计特异性引物,建立并优化SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测鉴定体系。利用该体系分别对从虎(东北虎、孟加拉虎、印支虎)和狮、豹、熊等13种非虎哺乳动物的肌肉、血液、毛发和肉骨粉中提取的DNA进行鉴定... 针对虎线粒体细胞色素b(Cyt b)基因设计特异性引物,建立并优化SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测鉴定体系。利用该体系分别对从虎(东北虎、孟加拉虎、印支虎)和狮、豹、熊等13种非虎哺乳动物的肌肉、血液、毛发和肉骨粉中提取的DNA进行鉴定分析。结果表明:虎血液、毛发和肌肉DNA样本均出现特异性的实时扩增曲线,平均熔解温度在(83.8±0.1)℃。狮、豹、熊等13种非虎哺乳动物DNA样本的检测结果均为阴性。检测灵敏度可达到在骨粉中检出质量分数为0.05%的虎源性成分。SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法具有方便、经济、灵敏度高和重复性好等特性,可用于虎制品的检测鉴定。 展开更多

关键词 SYBR GreenⅠ实时荧光PCR 虎 特异性鉴定

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多重PCR-DHPLC快速检测食品中产志贺毒素大肠杆菌 被引量：6

11

作者 晚观生 刘晓玉 +2 位作者 郑秋月 徐君怡 曹际娟 《工业微生物》 CAS CSCD 2016年第3期42-46,共5页

应用多重PCR(motiplex PCR)结合变性高效液相色谱技术(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)建立了快速检测食品中产志贺毒素大肠杆菌O111和O157的方法。以基因wzx O111、rfb EO157为靶基因,建立多重PCR-DHPLC方法... 应用多重PCR(motiplex PCR)结合变性高效液相色谱技术(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)建立了快速检测食品中产志贺毒素大肠杆菌O111和O157的方法。以基因wzx O111、rfb EO157为靶基因,建立多重PCR-DHPLC方法,进行特异性和灵敏度测试,同时进行RT-PCR检测比较灵敏度。该方法具有良好特异性,可以一次PCR扩增同时检测O111、O157;灵敏度达到25 CFU/m L。129份牛肉样品中检出1例O111,3例O157阳性;74份鸡肉样品中检测出O111、O157阳性各1例,67份蔬菜样品中未检测到O111、O157。本文建立O111、O157多重PCR-DHPLC检测方法,操作简便,特异性强,适用于产志贺毒素大肠杆菌筛选检测。 展开更多

关键词 多聚酶链式反应 变性高效液相色谱 检测 产志贺毒素大肠杆菌

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食品加工对过敏原活性的影响 被引量：6

12

作者 徐静 李一尘 +3 位作者 徐君怡 曹际娟 隋凯 李妍 《食品安全质量检测学报》 CAS 2012年第4期259-263,共5页

近年来,食物过敏性疾病的发病率明显上升,已成为影响人类健康最常见的全球性疾病之一。本文对食品加工中常用的几种方法对特定食品过敏原活性的影响进行了综述,这些加工方法包括热处理、高压处理、研磨、辐照、碱水解、梅拉德反应、酶... 近年来,食物过敏性疾病的发病率明显上升,已成为影响人类健康最常见的全球性疾病之一。本文对食品加工中常用的几种方法对特定食品过敏原活性的影响进行了综述,这些加工方法包括热处理、高压处理、研磨、辐照、碱水解、梅拉德反应、酶解、微生物发酵和基因工程等,并对存在的问题进行了分析。 展开更多

关键词 食品加工 过敏原 蛋白质

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转基因玉米BT11品系环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立 被引量：5

13

作者 王清华 徐君怡 +2 位作者 曹冬梅 刘宇 曹际娟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2013年第3期868-872,共5页

目的建立转基因玉米BT 11品系的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法根据转基因玉米BT 11品系特有序列(AY123624.1和AY629236)设计引物,优化建立LAMP反应体系,对该体系进行特异性、灵敏度、稳定性分析。结果本研究设计的引物具有很好的... 目的建立转基因玉米BT 11品系的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法根据转基因玉米BT 11品系特有序列(AY123624.1和AY629236)设计引物,优化建立LAMP反应体系,对该体系进行特异性、灵敏度、稳定性分析。结果本研究设计的引物具有很好的特异性,可特异性检测出转基因玉米BT 11品系;检测灵敏度可达0.5%;经精密度实验分析,该方法的稳定性良好。结论 LAMP方法检测转基因玉米品系BT 11具有特异性高、稳定性好、快速灵敏、过程可视等优点,具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 转基因玉米BT 11 环介导等温扩增(LAMP) 品系鉴定检测

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食品中沙门菌变性高效液相色谱检测技术的研究与方法建立 被引量：4

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作者 闫平平 曹际娟 +3 位作者 郑秋月 徐君怡 徐杨 谢明杰 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第9期1739-1741,1750,共4页

目的:应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中沙门菌的快速检测方法。方法:根据沙门菌fimY基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以沙门菌等89株参考菌株做特异性检测;沙门菌液体培养物稀释... 目的:应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中沙门菌的快速检测方法。方法:根据沙门菌fimY基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以沙门菌等89株参考菌株做特异性检测;沙门菌液体培养物稀释成不同梯度,做灵敏度检测。结果:试验结果表明该方法有很好的特异性,而其它非沙门菌均为阴性。该方法灵敏度较高,检测低限可达到45 cfu/ml。结论:该方法可以快速、准确检测食品中沙门菌,是食品中致病菌检测的新技术和新方法。 展开更多

关键词 DHPLC 沙门菌 fimY基因

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多重PCR—DHPLC技术检测肠出血性大肠杆菌O157：H7基因型的方法学研究 被引量：4

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作者 徐君怡 曹际娟 +3 位作者 郑秋月 王秋艳 刘淑艳 蒋丹 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期366-369,共4页

目的开发肠出血性大肠杆菌O157：H7的多重PER-变性高效液相色谱（DHPLC）检测方法。方法以编码大肠杆菌O157抗原的咖E基因、编码毒力因子的类志贺毒素（SET）基因为目的基因，选择2对引物，建立并优化了大肠杆菌O157：H7的多重PCR-DHPL... 目的开发肠出血性大肠杆菌O157：H7的多重PER-变性高效液相色谱（DHPLC）检测方法。方法以编码大肠杆菌O157抗原的咖E基因、编码毒力因子的类志贺毒素（SET）基因为目的基因，选择2对引物，建立并优化了大肠杆菌O157：H7的多重PCR-DHPLC检测体系。扩增产物分别为224bp和499bp。结果采用37株细菌验证了该多重PCR具有良好的特异性。PCR检测的灵敏度可达到4CFU／ml。结论实验证明，研究建立的多重PCR-DHPLC方法可特异、灵敏地实现对大肠杆菌O157：H7的检测。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157:H7 多重PCR 变性高效液相色谱

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实时荧光聚合酶链式反应技术快速鉴定仿刺参 被引量：3

16

作者 曹际娟 徐君怡 +2 位作者 徐杨 荣策 陈颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第10期145-148,共4页

基于仿刺参线粒体COX1基因、NAD4基因分别设计特异性检测引物和探针,采用TaqMan探针实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术进行仿刺参的特异性鉴定检测。对21种海参样品进行实时荧光PCR检测的特异性检验,并对每个... 基于仿刺参线粒体COX1基因、NAD4基因分别设计特异性检测引物和探针,采用TaqMan探针实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术进行仿刺参的特异性鉴定检测。对21种海参样品进行实时荧光PCR检测的特异性检验,并对每个样品做3个平行实验,计算Ct平均值、标准偏差及变异系数,评估检测方法的重复性。结果表明:所设计的引物和探针可以特异性的鉴别仿刺参,方法的变异系数均小于2%,表明本研究设计的引物和探针具有良好的重复性。本研究所建立的快速检测仿刺参的方法快速、简便,既克服了传统海参鉴别方法的局限性,同时又结合了荧光PCR技术高效率、低污染的优点,为仿刺参真伪鉴别研究提供了有价值的参考意见。 展开更多

关键词 实时荧光聚合酶链式反应 鉴别 仿刺参

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预包装食品中转基因成分现状分析

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作者 徐君怡 白景莲 +2 位作者 汪霖 刘雪华 杨春光 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2023年第7期1035-1041,共7页

目的对市售预包装食品中转基因成分状况进行抽样分析,并对转基因食品标识制度进行探讨。方法采用GB/T 38505—2020《转基因产品通用检测方法》,以大豆加工产品、玉米加工产品、油菜加工产品、水稻加工产品、马铃薯加工产品5个转基因作... 目的对市售预包装食品中转基因成分状况进行抽样分析,并对转基因食品标识制度进行探讨。方法采用GB/T 38505—2020《转基因产品通用检测方法》,以大豆加工产品、玉米加工产品、油菜加工产品、水稻加工产品、马铃薯加工产品5个转基因作物加工产品为研究对象,通过检测10个能覆盖所有商业化转基因品系的片段,同时对玉米、大豆、油菜、水稻和马铃薯5大作物的内源基因进行检测。根据扩增结果可判断样品是否含有转基因成分。结果抽检的42种产品中,共检出6批次大豆类制品、1批次马铃薯类制品、3批次玉米类制品含有转基因成分。结论现有的预包装食品中有一定比例产品可检出转基因成分,需要进一步严格规范食品标识制度。 展开更多

关键词 预包装食品 标签 转基因成分 检测

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变性高效液相色谱法高通量检测肉制品中常见致病菌 被引量：3

18

作者 李苏龙 张辛博 +3 位作者 徐义刚 郑秋月 徐君怡 曹际娟 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第5期93-94,共2页

关键词 变性高效液相色谱 高通量分析 高效液相色谱法 致病菌 肉制品 检测 PLC技术 liquid

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SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测鉴定狮制品 被引量：2

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作者 徐君怡 曹际娟 +1 位作者 王秋艳 王长文 《野生动物》 2010年第4期171-174,共4页

为建立SYBR Green I实时荧光PCR检测鉴定狮(Panthera Leo)制品的方法,本文在豹属动物线粒体细胞色素b基因上设计狮特异性引物,建立并优化了SYBR Green I实时荧光PCR检测鉴定体系,采用17种血液、组织和骨粉类样品的DNA,通过扩增曲线和融... 为建立SYBR Green I实时荧光PCR检测鉴定狮(Panthera Leo)制品的方法,本文在豹属动物线粒体细胞色素b基因上设计狮特异性引物,建立并优化了SYBR Green I实时荧光PCR检测鉴定体系,采用17种血液、组织和骨粉类样品的DNA,通过扩增曲线和融解曲线分析检测的特异性和灵敏度,并用狮肉粉和牛肉骨粉系列百分比混合物进行抗干扰能力分析。结果显示,狮血液和组织DNA样品均出现特异性的实时扩增曲线,平均熔解温度在84±0.2℃。虎、豹、熊等14种哺乳动物DNA样本的检测结果均为阴性。灵敏度检测显示,本实验所建立的SYBRGreen I实时荧光PCR方法能够检测出10 pg/μL的狮组分DNA。抗干扰能力显示在骨粉中狮的成分最低检出含量为0.1%。这些结果说明,本文建立的SYBR Green I实时定量PCR方法具有方便、经济、灵敏度高和重复好等特性,可用于狮源性制品的检测鉴定。 展开更多

关键词 SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR 狮 细胞色素B基因

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转基因玉米质粒分子国家标准样品的构建 被引量：2

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作者 郑秋月 曹际娟 +1 位作者 徐君怡 赵昕 《标准科学》 2012年第12期48-51,共4页

本文研制转基因玉米常见的4个品系:BT11、MON810、NK603和T25质粒分子国家标准样品。研究重点包括目标序列和内标准基因序列的选择和扩增、标准样品定值和分析等。均匀性和稳定性结果表明,所研制的转基因玉米4个品系标准样品均匀稳定。... 本文研制转基因玉米常见的4个品系:BT11、MON810、NK603和T25质粒分子国家标准样品。研究重点包括目标序列和内标准基因序列的选择和扩增、标准样品定值和分析等。均匀性和稳定性结果表明,所研制的转基因玉米4个品系标准样品均匀稳定。采用PicoGreen DNA分子荧光定量方法定值标准样品。多家单位合作定值,确定标准样品的标准值及其不确定度。所研制的转基因玉米质粒分子标准样品获得了国家标准样品证书,适用于转基因产品的定量和定性测定。 展开更多

关键词 转基因玉米BT11品系 转基因玉米MON810品系 转基因玉米NK603品系 转基因玉米T25品系 质粒分子国家标准样品

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