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SFC和UPLC方法用于丹参饮片中多成分研究 被引量：3
1
作者 张光华 付龙 +4 位作者 王京辉 宋彬彬 郭伟 张琳培 钱忠直 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期940-947,共8页
目的:建立SFC-PDA法同时检测丹参饮片中4个脂溶性丹参酮类成分,以及UPLC法同时测定丹参饮片中3个水溶性丹酚酸类成分,以7个成分的测定结果综合评价丹参饮片的质量。方法:采用SFC-PDA法,使用Viridis■HSS SB C18100A(3.0 mm×100 mm,... 目的:建立SFC-PDA法同时检测丹参饮片中4个脂溶性丹参酮类成分,以及UPLC法同时测定丹参饮片中3个水溶性丹酚酸类成分,以7个成分的测定结果综合评价丹参饮片的质量。方法:采用SFC-PDA法,使用Viridis■HSS SB C18100A(3.0 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以二氧化碳(A)-[正庚烷-异丙醇(8∶2)(B)]为流动相,梯度洗脱,流速1.5 mL·min^-1,柱温45℃,背压13.8 MPa;采用UPLC-PDA法,使用BEH Shield RP(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1,柱温30℃。结果:在建立的色谱条件下,丹参饮片中7个主要成分在各自的液相系统中分离完全,线性良好,精密度、重复性、稳定性及回收率实验结果均符合含量测定要求,同时还比较了用HPLC和SFC 2种方法测定脂溶性成分时的仪器灵敏度,结果为一个数量级。结论:SFC方法快速简便、结果准确,在节省溶剂、减少环境污染的方面具有独特优势,同时采用UPLC方法测定水溶性成分,2种方法可用于丹参饮片的质量分析,同时大大降低检测成本。 展开更多
关键词 超临界流体色谱 超高效液相色谱 含量测定 丹参饮片 丹参酮类成分 丹酚酸类成分
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微生物发酵优化透明质酸生产的研究进展 被引量：5
2
作者 张琳培 《轻工科技》 2018年第3期18-20,30,共4页
透明质酸是一种高分子糖胺聚糖,广泛应用于食品、化妆品和医疗等领域。微生物发酵生产透明质酸具有不受原料限制、产品质量稳定、纯度高和成本低等优点,已逐步取代动物组织提取法,同时育种技术和发酵优化实现了透明质酸的高产量和高分... 透明质酸是一种高分子糖胺聚糖,广泛应用于食品、化妆品和医疗等领域。微生物发酵生产透明质酸具有不受原料限制、产品质量稳定、纯度高和成本低等优点,已逐步取代动物组织提取法,同时育种技术和发酵优化实现了透明质酸的高产量和高分子量。综述近年来利用菌种诱变选育、基因工程育种、代谢工程改造、发酵优化等策略提高透明质酸产量和分子量的研究进展,阐述不同策略的作用机理与效果及存在的问题,并对发展前景进行展望。 展开更多
关键词 透明质酸 产量 分子量 菌种改造 发酵优化
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途径优化强化枯草芽胞杆菌合成肝素前体 被引量：1
3
作者 张琳培 王浩 +3 位作者 周正雄 堵国成 陈坚 康振 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期936-945,共10页
肝素前体是化学酶法合成肝素的起点,肝素前体的微生物高效合成具有重要意义。在已构建的产肝素前体的枯草芽胞杆菌((1.71±0.08)g/L)中,分析了UDP-葡萄糖醛酸(UDP-GlcUA)途径中关键酶基因(pgcA、gtaB、tuaD)以及UDP-乙酰氨基葡糖(UD... 肝素前体是化学酶法合成肝素的起点,肝素前体的微生物高效合成具有重要意义。在已构建的产肝素前体的枯草芽胞杆菌((1.71±0.08)g/L)中,分析了UDP-葡萄糖醛酸(UDP-GlcUA)途径中关键酶基因(pgcA、gtaB、tuaD)以及UDP-乙酰氨基葡糖(UDP-GlcNAc)途径中关键酶基因(glmS、glmM、glmU)的过量表达对肝素前体产量及其分子量的影响。在此基础上,通过共表达tuaD、gtaB、glmU、glmM和glmS基因,摇瓶中肝素前体产量提高至(2.89±0.11)g/L,分子量为(75.90±1.18)kDa。通过在3 L发酵罐中进行补料分批发酵,肝素前体的产量最终积累到(7.25±0.36)g/L,分子量为(46.66±2.71)kDa,为工业化生产肝素奠定了基础。 展开更多
关键词 肝素前体 枯草芽胞杆菌 途径优化 产量 分子量
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烟草节杆菌肌酸酶的高效异源表达与应用分析 被引量：1
4
作者 戴俊 康振 +2 位作者 张琳培 陈坚 堵国成 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期465-470,共6页
肌酸酶(CRE)是临床检测血液和尿液中肌酐的关键酶之一。作者成功地从烟草节杆菌23710(Arthrobacter nicotianae 23710)中克隆了CRE基因,并实现了CRE在Escherichia coli BL21(DE3)中的表达。经过硫酸铵分级沉淀、阴离子交换色谱、分子筛... 肌酸酶(CRE)是临床检测血液和尿液中肌酐的关键酶之一。作者成功地从烟草节杆菌23710(Arthrobacter nicotianae 23710)中克隆了CRE基因,并实现了CRE在Escherichia coli BL21(DE3)中的表达。经过硫酸铵分级沉淀、阴离子交换色谱、分子筛后得到了较纯的重组CRE,比酶活达到了20.25 U/mg。重组CRE对于螯合剂EDTA、表面活性剂(Tween20,和Triton X-100)以及常用的防腐剂Na N3有很好的耐受性。 展开更多
关键词 肌酸酶 烟草节杆菌 重组酶表达 应用分析
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信号肽突变促进透明质酸酶分泌的高通量筛选方法
5
作者 张琳培 《轻工科技》 2019年第3期1-3,共3页
为了增强透明质酸酶在微生物胞外的分泌表达,本文采用强组成型启动子P43,在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168基因组中整合表达水蛭来源的透明质酸酶,并利用RECODE突变技术构建信号肽突变库,通过高通量96微孔板初筛,将1000株突变株中... 为了增强透明质酸酶在微生物胞外的分泌表达,本文采用强组成型启动子P43,在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168基因组中整合表达水蛭来源的透明质酸酶,并利用RECODE突变技术构建信号肽突变库,通过高通量96微孔板初筛,将1000株突变株中胞外酶活提高50%以上的20株突变体进行摇瓶复筛,最终获得了三株胞外酶活显著提升的突变株B. subtilis MspLHyalA-C(比野生型LHyal酶活提高55.50%-66.85%),摇瓶中粗酶活最高达到6.04×104 U/mL,为透明质酸酶的定向进化提供了可行性方案。 展开更多
关键词 透明质酸酶 信号肽 枯草芽孢杆菌 酶活 高通量筛选
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