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抗病毒中药研究的最新进展 被引量：74
1
作者 张其威 张楚瑜 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期116-119,共4页
关键词 抗病毒 中药 研究进展
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建立快速定量检测猪瘟兔化弱毒苗的荧光定量PCR技术 被引量：31
2
作者 陈玉栋 张楚瑜 +4 位作者 邹俊煊 潘兹书 陈立新 李田 郭长林 《中国病毒学》 CSCD 2003年第2期124-128,共5页
在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样... 在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样品的变异系数为2.3%-5.1%(n=10),疫苗样品组内实验变异系数为0.85%-2.8%(n=5)、组间实验为2.5%-7.3%(n=5),对同一样品分5次RNA提取和逆转录,其变异系数为5.0%;对9份疫苗样品进行了检测,与兔体定型热反应方法相比较,有很好的相关性;整个检测过程仅需4h。该法可望取代传统的兔体定型热反应用于疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供了一种新的、简捷有效的工具。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒苗 快速定量检测 荧光定量PCR技术 猪瘟
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应用荧光定量PCR技术快速定量检测猪瘟病毒 被引量：24
3
作者 温国元 万超 +1 位作者 潘兹书 张楚瑜 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期746-750,共5页
采用荧光定量PCR技术对猪瘟病毒进行快速定量检测.实验证明,该方法的检测灵敏度可达10拷贝/μL,对于不同毒株以及各种组织样品检测结果均为阳性.通过该方法与RT PCR、nPCR的比较,发现该方法检测灵敏度比RT PCR高100倍,与nPCR具有相同的... 采用荧光定量PCR技术对猪瘟病毒进行快速定量检测.实验证明,该方法的检测灵敏度可达10拷贝/μL,对于不同毒株以及各种组织样品检测结果均为阳性.通过该方法与RT PCR、nPCR的比较,发现该方法检测灵敏度比RT PCR高100倍,与nPCR具有相同的灵敏度,并且该方法避免了常规PCR电泳检测所带来的高污染率.因此,该方法以其快速、灵敏、低污染率的优点,会在猪瘟的早期检测及预防、控制上起到重要作用. 展开更多
关键词 猪瘟病毒 荧光定量PCR 定量检测
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猪瘟病毒石门株全基因组cDNA文库构建、序列测定及分析 被引量：7
4
作者 黄茜华 张楚瑜 +7 位作者 王家富 付烈振 王宁 朱燕 怀济森 张玮 于建石 许晖 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第17期1823-1826,共4页
根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了 1 8对覆盖全长基因组的引物 .应用RT PCR技术从猪瘟病毒石门株感染的猪血中扩增出各相应的cDNA片段 ,分别克隆 ,构建了石门株全基因组的cDNA文库并完成了序列测定 .石门株基因组全长 1 2 2 98nt... 根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了 1 8对覆盖全长基因组的引物 .应用RT PCR技术从猪瘟病毒石门株感染的猪血中扩增出各相应的cDNA片段 ,分别克隆 ,构建了石门株全基因组的cDNA文库并完成了序列测定 .石门株基因组全长 1 2 2 98nt,其中 5′端和 3′端非编码区长度分别为 373和 2 31nt,中间一个大的开放阅读框长 1 1 6 97nt,翻译成一个包含3898个氨基酸残基的多聚蛋白 . 展开更多
关键词 猪瘟病毒石门株基因组 CDNA文库 克隆 序列测定 序列分析
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猪瘟病毒感染性cDNA克隆的构建及其致病性 被引量：13
5
作者 王毅 吴海祥 +3 位作者 张楚瑜 伊光辉 曹晟 温国元 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期43-47,共5页
为了建立研究猪瘟病毒的技术平台,利用RT PCR技术构建了猪瘟病毒中国石门株(Shimen)的全长有感染性cDNA克隆pT7SM。通过体外转录线性化的pT7SM并将转录的RNA转染至PK 15细胞中,获得了猪瘟病毒粒子。再用间接免疫荧光法测定了其生长曲线... 为了建立研究猪瘟病毒的技术平台,利用RT PCR技术构建了猪瘟病毒中国石门株(Shimen)的全长有感染性cDNA克隆pT7SM。通过体外转录线性化的pT7SM并将转录的RNA转染至PK 15细胞中,获得了猪瘟病毒粒子。再用间接免疫荧光法测定了其生长曲线,通过电镜观察到重组病毒呈球形,具有囊膜结构。进一步把获得的猪瘟病毒粒子感染非免疫实验猪,结果子代病毒与石门株类似,对非免疫实验猪有强烈的致病性,证明该全长cD NA克隆可靠稳定,忠实地保留了石门株病毒的感染性和致病特征。由此为进一步探讨猪瘟病毒的致弱机制及病毒与机体相互作用的机制打下了良好的基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 全长CDNA克隆 体外转录 电镜观测 致病性 RT-PCR 猪瘟 疫苗
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表达猪瘟病毒E2基因和gfp报道基因的伪狂犬病病毒双基因转移载体的构建 被引量：9
6
作者 潘兹书 张楚瑜 +1 位作者 陈玉栋 闵平 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期466-470,共5页
将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证... 将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证实 ,转染BHK2 1细胞的pTKE2在感染PRV的情况下 ,能表达E2蛋白 采用特异性引物PCR方法扩增gfp表达盒 ,对酶切位点进行改造 ,将其克隆到pTKE2的SalⅠ位点 ,构建了用PRVgG启动子和HCMVIE启动子分别控制E2基因和gfp基因表达、两基因取向相反的双基因转移载体pTKE2 .GFP 将双基因转移载体pTKE2 .GFP转染BHK2 1细胞中 ,12h后在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的GFP表达 。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 转移载体 绿色荧光蛋白 E2基因
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中国猪瘟兔化弱毒兔脾毒NS2-3基因的序列分析 被引量：7
7
作者 王家富 张楚瑜 +2 位作者 傅烈振 黄茜华 张芄伟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期150-154,共5页
根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了覆盖有 NS2 - 3全基因的 4对引物 ,应用RT -PCR技术从接种了猪瘟兔化弱毒 (hogcholeraviruslapinizedChinesestrain ,HCLV)的兔脾组织中 ,成功地扩增了 NS 2 - 3基因 ,将其克隆到T载体后 ,测定... 根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了覆盖有 NS2 - 3全基因的 4对引物 ,应用RT -PCR技术从接种了猪瘟兔化弱毒 (hogcholeraviruslapinizedChinesestrain ,HCLV)的兔脾组织中 ,成功地扩增了 NS 2 - 3基因 ,将其克隆到T载体后 ,测定了其核苷酸序列。结果显示 ,所克隆的NS 2 - 3基因长 2 96 4个核苷酸 ,编码 988个氨基酸。用DNASIS和PROSIS软件分析表明 ,该基因具有丝氨酸类蛋白酶活性及含有解旋酶超家族特征性保守序列。核苷酸序列同源性分析表明 ,HCLV与国外报导的 8株HCV毒株“C”、Riems、ALD、GPE、Glentorf、CAP、Brescia和Alfort株NS 2 - 3基因核苷酸序列同源性分别为 99%、99%、96 %、96 %、95 %、95 %、94%和 86 % ,推导的氨基酸序列同源性分别为 99%、99%、98%、98%、98%、97%、97%和 95 % ,氨基酸序列的高度同源性表明了NS 2 - 3是猪瘟病毒中高度保守的蛋白质之一 ,这与该基因产物参与病毒复制及多聚蛋白前体加工过程中的重要作用相对应。 展开更多
关键词 中国猪瘟兔化弱毒 NS2-3基因 序列分析 疫苗
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猪瘟病毒基因组非编码区的定性、定量与结构分析 被引量：3
8
作者 肖明 张楚瑜 +1 位作者 祝志展 吴海祥 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第7期544-551,共8页
猪瘟病毒是猪瘟的病原体，弄清其基因组的复制与表达是研究猪瘟病毒致病机理、研制抗病毒药物的核心．基因组的非编码区（ＵＴＲ）是复制和表达的主要调节区，为了确定复制与表达位点在非编码区的具体位置以及主要特征，对猪瘟病毒石门... 猪瘟病毒是猪瘟的病原体，弄清其基因组的复制与表达是研究猪瘟病毒致病机理、研制抗病毒药物的核心．基因组的非编码区（ＵＴＲ）是复制和表达的主要调节区，为了确定复制与表达位点在非编码区的具体位置以及主要特征，对猪瘟病毒石门株以及其他毒株基因组的３’和５’非编码区进行了生物信息学的定性、定量与结构分析，分别得到了 １７个毒株的 ３’ ＵＴＲ和 ５６个毒株的 ５’ ＵＴＲ与调节复制、表达起始有关的位点以及共有的保守序列和结构成分．这些顺式调控元件可能是复制起始识别位点、宿主细胞转录因子的结合位点和核糖体起始蛋白质合成的作用位点．据此，对猪瘟病毒复制与表达的机理进行了探讨，为进一步实验提供了非常明确的方向，同时也为与猪瘟病毒同科的丙型肝炎病毒、其他瘟病毒以及其他正链ＲＮＡ病毒基因组复制的研究奠定了基础． 展开更多
关键词 基因表达 猪瘟病毒 非编码区 RNA复制 信息量 正链RNA病毒 基因组
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隐马尔可夫模型—改进的预测蛋白质二级结构方法 被引量：9
9
作者 石峰 莫忠息 张楚瑜 《生物数学学报》 CSCD 2004年第2期233-237,共5页
引入蛋白质二级结构预测的新方法:隐马尔可夫模型.其中将蛋白质的二级结构分成三类:H(指α-螺旋),E(β-折叠)及O(包括转角,卷曲及其他结构).该方法属于统计方法,但考虑了相邻氨基酸之间的相互作用(体现在状态传输概率).通过模型的改进... 引入蛋白质二级结构预测的新方法:隐马尔可夫模型.其中将蛋白质的二级结构分成三类:H(指α-螺旋),E(β-折叠)及O(包括转角,卷曲及其他结构).该方法属于统计方法,但考虑了相邻氨基酸之间的相互作用(体现在状态传输概率).通过模型的改进及参数的确定后,我们编制了程序HMMPS.用它来预测蛋白质二级结构,具有很高的准确度.其中关于H1E和O的准确率分别达到80.1％,72.0％和63.2％.这表明,我们的方法是较为可靠的. 展开更多
关键词 隐马尔可夫模型 VITERBI算法 二级结构预测
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猪瘟病毒石门株与兔化弱毒株E0糖蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：4
10
作者 王家富 张楚瑜 +2 位作者 王宁 傅烈振 黄茜华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期32-37,共6页
参考已发表的猪瘟病毒序列，设计并合成了一对引物，应用ＲＴＰＣＲ 技术，扩增了猪瘟兔化弱毒（Ｈｏｇ ｃｈｏｌｅｒａ ｖｉｒｕｓ ｌａｐｉｎｉｚｅｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｓｔｒａｉｎ ， ＨＣＬＶ） 和石门强毒株的Ｅ０ 糖蛋白基因，... 参考已发表的猪瘟病毒序列，设计并合成了一对引物，应用ＲＴＰＣＲ 技术，扩增了猪瘟兔化弱毒（Ｈｏｇ ｃｈｏｌｅｒａ ｖｉｒｕｓ ｌａｐｉｎｉｚｅｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｓｔｒａｉｎ ， ＨＣＬＶ） 和石门强毒株的Ｅ０ 糖蛋白基因，并将其克隆到ｐＧＥＭＴ 载体中，测定了其核苷酸序列，并推导了其氨基酸序列。结果表明我国这两株强弱不同毒株Ｅ０ 糖蛋白核苷酸序列同源性和推导的氨基酸序列同源性分别为９５－０ ％ 和９４－３ ％ ，有１３ 个氨基酸的差异，ＨＣＬＶ 比石门株多了一个潜在的Ｎ糖基化位点。将我国这两株病毒与国外已报导的ＨＣＶ 毒株Ｅ０ 基因序列进行了比较，发现石门株与日本的两株毒株ＡＬＤ 和ＧＰＥ－ 同源性较高，核苷酸序列同源性分别为９７－４ ％ 和９６－５ ％ ，氨基酸同源性分别为９７－４ ％ 和９６－０ ％ ，而与欧洲Ｂｒｅｓｃｉａ 株和Ａｌｆｏｒｔ 株同源性较低，核苷酸同源性分别为９２－２ ％ 和８６－５ ％ ，氨基酸同源性为９５－２ ％ 和９２－５ ％ ， ＨＣＬＶ 与ＡＬＤ、ＧＰＥ－ 、Ｂｒｅｓｃｉａ、Ａｌｆｏｒｔ 株核苷酸同源性分别为９５－６ ％ 、９４－９ ％ 、９１－３ ％ 、８５－５ ％ ，推导的氨基酸同源性分别为９３－４ ％ 、９２－５ ％ 展开更多
关键词 猪瘟病毒 序列分析 EO糖蛋白 兔化弱毒疫苗
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应用反转录 - 聚合酶链技术快速检测猪瘟病毒RNA的研究 被引量：4
11
作者 傅烈振 朱燕 +2 位作者 王宁 潘滋书 张楚瑜 《中国兽医科技》 CSCD 1998年第6期3-5,共3页
依据猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）５′端非编码区保守序列设计一对ＰＣＲ引物，建立了检测ＣＳＦＶ的反转录聚合酶链（ＲＴＰＣＲ）技术。应用该技术从猪瘟兔化弱毒感染兔的脾、淋巴结、肾与肌肉等以及石门株强毒感染猪的脾与肌肉和湖北分离... 依据猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）５′端非编码区保守序列设计一对ＰＣＲ引物，建立了检测ＣＳＦＶ的反转录聚合酶链（ＲＴＰＣＲ）技术。应用该技术从猪瘟兔化弱毒感染兔的脾、淋巴结、肾与肌肉等以及石门株强毒感染猪的脾与肌肉和湖北分离毒株感染猪组织匀浆液中均特异扩增出了１条预期大小为１９４ｂｐ的片段，从实验感染兔和猪的血液中也特异扩增出了该片段，但对牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）和健康兔脾总ＲＮＡ以及健康猪的血液ＲＮＡ扩增均为阴性。采用这种方法，对实验感染兔脾总ＲＮＡ的检测灵敏度可达１０－８ｇ，表明其灵敏度足以达到临床检验的要求。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 RNA 快速检测 PT-PCR技术
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猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0的RNA酶活性及其研究进展 被引量：4
12
作者 王宁 付烈振 张楚瑜 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期354-355,共2页
关键词 猪瘟病毒 毒囊膜糖蛋白 RNA酶
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伪狂犬病毒胸苷激酶基因变异引起的病毒致弱作用 被引量：10
13
作者 潘兹书 张楚瑜 +1 位作者 丁建华 闵平 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第16期1364-1367,共4页
为揭示PRV tk基因结构与毒力的相互关系, tk基因结构变异对病毒生物学特性的影响和探讨病毒的致弱机理, 以伪狂犬病毒湖北株(PRV HB)为材料, 用BUdR诱变选择, 分离出BUdR抗性的PRV TK-突变株. 在对野毒株和TK-突变株tk基因克隆和测序的... 为揭示PRV tk基因结构与毒力的相互关系, tk基因结构变异对病毒生物学特性的影响和探讨病毒的致弱机理, 以伪狂犬病毒湖北株(PRV HB)为材料, 用BUdR诱变选择, 分离出BUdR抗性的PRV TK-突变株. 在对野毒株和TK-突变株tk基因克隆和测序的基础上, 分析比较了两种毒株tk基因的一级结构. 测定的PRV HB野毒株tk基因片段长1587 bp, GC含量为72.7%. 包含一个1098 bp的ORF. 编码366个氨基酸残基组成的蛋白. ORF内有2个137 bp核苷酸的重复序列, 两者以一个A连接. 测定的TK-突变株tk基因片段长1458 bp, 野毒株中137 bp重复序列之一和连接A被自然删除, 另有一个8核苷酸(GCGCGCCC)重复片段的插入, 其他所有核苷酸与野毒株一致. 在TK-突变株中因核苷酸片段的缺失和插入, tk基因发生移框突变, 导致转译提前终止, 不能产生有功能的TK蛋白. 氨基酸序列分析显示, PRV HB TK具有疱疹病毒TK共有的保守功能区并多出一个保守的DRH功能位点. 实验还证实, TK-突变株具有生物学遗传稳定性, 与野毒株比较, 其毒力显著降低. 用TK-突变株接种小鼠, 能诱导小鼠产生针对PRV强毒株致死攻击的有效保护. 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 胸苷激酶 核苷酸序列 TK^-突变株 基因变异 病毒致弱作用 猪传染病
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正链RNA病毒基因组感染性克隆研究进展 被引量：6
14
作者 吴海祥 张楚瑜 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期493-499,共7页
综合叙述了构建正链RNA病毒基因组全长感染性cDNA克隆的基本思路和关键技术 ,并总结了影响基因组全长克隆感染性的因素 还简要介绍了利用正链RNA病毒基因组感染性克隆所取得的一些研究进展 。
关键词 RNA病毒 基因组全长cDNA 感染性克隆 研究进展
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PCR法与荧光定量PCR法在人巨细胞病毒检测中的作用比较 被引量：8
15
作者 吴旗 虞涛 +2 位作者 游上游 邹俊煊 张楚瑜 《华中医学杂志》 2006年第1期10-11,16,共3页
目的比较常规PCR法与荧光定量PCR(FQ-PCR)法在人巨细胞病毒(HCMV)检测中的作用,寻找更适合于HCMV检测的方法。方法构建携带CMV-DNA的标准质粒,利用常规PCR技术及FQ-PCR技术分别对不同稀释度的标准质粒进行检测。结果FQ-PCR法对HCMV标准... 目的比较常规PCR法与荧光定量PCR(FQ-PCR)法在人巨细胞病毒(HCMV)检测中的作用,寻找更适合于HCMV检测的方法。方法构建携带CMV-DNA的标准质粒,利用常规PCR技术及FQ-PCR技术分别对不同稀释度的标准质粒进行检测。结果FQ-PCR法对HCMV标准质粒检测的灵敏度及线性范围均显著高于常规PCR法。结论FQ-PCR法比常规PCR法更适合HCMV病毒的检测。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 巨细胞病毒属 荧光
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猪瘟病毒囊膜糖蛋白DNA疫苗的研制 被引量：6
16
作者 王宁 张楚瑜 +1 位作者 付烈振 丁建华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第3期201-203,共3页
构建了含有猪瘟病毒石门株囊膜糖蛋白（Ｅ２）基因的重组真核表达质粒ｐＲＣＳＥ２。将ｐＲＣＳＥ２和空载体ｐＲＣ分别免疫小鼠，ＥＬＩＳＡ检测结果表明：仅ｐＲＣＳＥ２免疫鼠可以产生猪瘟病毒的特异抗体。ＤＮＡ疫苗在许多传染病研... 构建了含有猪瘟病毒石门株囊膜糖蛋白（Ｅ２）基因的重组真核表达质粒ｐＲＣＳＥ２。将ｐＲＣＳＥ２和空载体ｐＲＣ分别免疫小鼠，ＥＬＩＳＡ检测结果表明：仅ｐＲＣＳＥ２免疫鼠可以产生猪瘟病毒的特异抗体。ＤＮＡ疫苗在许多传染病研究中已取得可喜成果，因此猪瘟病毒ＤＮＡ疫苗可能会成为防制猪瘟的一条新的途径。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 DNA疫苗 囊膜糖蛋白
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生物信息学在医学上的应用 被引量：9
17
作者 汪凡军 张楚瑜 《国际检验医学杂志》 CAS 2006年第2期161-163,共3页
生物信息学是利用计算和分析工具收集、解释生物学数据的学科,其基础是4大类生物学数据库。生物信息学在疾病相关基因的发现、新的药物分子靶点的发现、创新药物设计以及基因芯片的设计与数据处理等医学应用研究方面将发挥重要作用。
关键词 医学信息学 计算生物学
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猪瘟病毒石门株NS2-3基因片段的序列测定及比较 被引量：2
18
作者 黄茜华 张楚瑜 +2 位作者 王宁 傅烈振 王家富 《中国病毒学》 CSCD 1999年第2期163-168,共6页
根据猪瘟病毒Ｃ株的序列，以计算机辅助设计，化学合成１对引物（ＰＦ５６４８／ＰＲ６６０４），应用ＲＴＰＣＲ技术从感染猪血中成功地扩增了我国猪瘟病毒强毒石门株ＮＳ２３基因片段，大小为９５７ｂｐ，位于ＮＳ３基因的中部Ｎ... 根据猪瘟病毒Ｃ株的序列，以计算机辅助设计，化学合成１对引物（ＰＦ５６４８／ＰＲ６６０４），应用ＲＴＰＣＲ技术从感染猪血中成功地扩增了我国猪瘟病毒强毒石门株ＮＳ２３基因片段，大小为９５７ｂｐ，位于ＮＳ３基因的中部ＮＴＰａｓｅ和Ｈｅｌｉｃａｓｅ活性区。克隆后测序，结果表明该段基因产物具有解旋酶超家族全部七个特征性保守序列，包括共同的ＮＴＰ结合基序Ａ位点（ＧＸＧＫＴ／Ｓ）和Ｂ位点（３ｈｙ，２ｘ）Ｄ。序列同源性比较表明，石门株与日本的ＡＬＤ和ＧＰＥ－株同源性最高，与其它３株猪瘟病毒（Ｃ株、Ｂｒｅｓｃｉａ株和Ａｌｆｏｒｔ株）的同源性也很高，并与２株牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）（ＮＡＤＬ株和ＳＤ１株）也有较高的同源性，尤其是由核苷酸序列推导的氨基酸序列，同源性均大于９０％，是瘟病毒属基因组中最保守的区段。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 石门株 NS2-3基因片段 序列分析
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呼吸道合胞病毒实时荧光定量PCR检测 被引量：8
19
作者 张其威 游上游 +3 位作者 孙继民 吴旗 余春华 张楚瑜 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第7期847-852,共6页
目的建立一种快速、准确诊断人呼吸道合胞病毒(hRSV)早期感染的实时荧光定量PCR检测方法。方法以hRSV最保守的N基因序列为参考,设计两对特异的引物和一条TaqMan荧光探针,在LightCycler定量PCR检测仪上对93例下呼吸道感染患儿进行hRSVRN... 目的建立一种快速、准确诊断人呼吸道合胞病毒(hRSV)早期感染的实时荧光定量PCR检测方法。方法以hRSV最保守的N基因序列为参考,设计两对特异的引物和一条TaqMan荧光探针,在LightCycler定量PCR检测仪上对93例下呼吸道感染患儿进行hRSVRNA检测,并与病毒分离培养、常规PCR、巢式PCR方法和ELISA法相比较。结果以PCR模板浓度来定义,该方法线形范围为1×102￣1×107cDNAcopies/μl,灵敏度达1×102cDNAcopies/μl,和巢式PCR相同,比常规PCR高10倍。用人脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、柯萨奇病毒2型、甲型、乙型流感病毒、腺病毒7型作对照,均无预期扩增产物和荧光的产生;该方法在LightCycler和Rotor-Gene两种仪器上的定量结果具有一致性;采用该法对93例患儿行FQ-PCR检测出阳性44例(43.9%),ELISA方法检测阳性4例(4.3%),两者相关性不高。hRSV浓度的高低与患儿临床症状之间的关系不是很明显。结论该方法可快速、灵敏、特异、定量检测hRSV,在hRSV感染的早期诊断和疗效监测方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 实时监测 灾光定量PCR TAQMAN
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猪瘟病毒石门株NS5A基因的序列测定及同源比较
20
作者 黄茜华 张楚瑜 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期154-157,共4页
根据已发表的猪瘟病毒序列，设计并合成了３对引物，利用ＲＴＰＣＲ技术，从猪瘟病毒石门株感染猪血中成功扩增了各ｃＤＮＡ片段，覆盖整个ＮＳ５Ａ基因，片段大小各为７７４，６８５，９１７ｂｐ。克隆后测序。序列比较结果显示，该... 根据已发表的猪瘟病毒序列，设计并合成了３对引物，利用ＲＴＰＣＲ技术，从猪瘟病毒石门株感染猪血中成功扩增了各ｃＤＮＡ片段，覆盖整个ＮＳ５Ａ基因，片段大小各为７７４，６８５，９１７ｂｐ。克隆后测序。序列比较结果显示，该基因在ＣＳＦＶ中较为保守。与同属的ＢＶＤＶ的序列同源性较低，且氨基酸的同源性低于核苷酸的同源性，推测它参与决定瘟病毒种的特异性。 展开更多
关键词 猪瘟病毒石门株 NS5A基因 序列测定 同源比较
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