斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株(C3)ie0基因的序列分析和表达 被引量：3

1

作者 盛晔 胡兆丽 +2 位作者 王文兵 李新平 朱江 《科技通报》 2007年第3期372-377,381,共7页

从斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)日本株(C3)基因组中克隆了ie0基因。核苷酸序列分析表明,该克隆片断涵盖了864 bp的读码框及5′端启动子区475 bp和3′端终止区90 bp的序列。氨基... 从斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)日本株(C3)基因组中克隆了ie0基因。核苷酸序列分析表明,该克隆片断涵盖了864 bp的读码框及5′端启动子区475 bp和3′端终止区90 bp的序列。氨基酸序列分析显示,在SpltMNPV IE0蛋白N-端23～47位以及111～126位富含酸性氨基酸和疏水性氨基酸残基,C′端第225～271位具有典型的CX2CX14CCX4CX2CX15CX2C双锌指基序,该结构在所比较的9个昆虫杆状病毒IE0蛋白中是十分保守的。联配分析表明,SpltMNPV日本株(C3)的核苷酸序列和氨基酸序列与其他9种核多角体病毒的同源性有较大差异。以ie0基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒(Bombyx mori Nu-cleopolyhedrovirus,BmNPV)与苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapcid nucle-opolyhedrovirus,AcMNPV)归到同一分枝,这与以p10、gp37和egt基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树结果一致。并进行了大肠杆菌表达和Western Blotting分析。 展开更多

关键词 病毒学 斜纹夜蛾 核型多角体病毒 ie0基因 序列分析

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家蚕核型多角体病毒ie0基因对病毒复制和转录的影响

2

作者 张婷 李俊 +2 位作者 张媛媛 全滟平 于威 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期645-655,共11页

ie0基因是家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的一个晚期基因,该基因编码氨基酸序列的高度保守性及多种结构域提示其在病毒感染过程中的重要性。利用Red同源重组技术,分别对BmNPV ie0基因编码不同结构域的序列以及完整序列进行敲除构建ie0缺失... ie0基因是家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的一个晚期基因,该基因编码氨基酸序列的高度保守性及多种结构域提示其在病毒感染过程中的重要性。利用Red同源重组技术,分别对BmNPV ie0基因编码不同结构域的序列以及完整序列进行敲除构建ie0缺失型病毒,以野生型病毒为对照,研究ie0序列完全或部分缺失对病毒转录、复制及对宿主细胞致病能力等方面的影响。结果表明ie0基因完整序列或编码各结构域的序列缺失后均会对病毒产生不同影响:宿主细胞中完全缺失型和部分缺失型病毒滴度均有不同程度降低;完全缺失型和部分缺失型病毒基因组的拷贝数均与野生型病毒无显著差异;部分缺失型病毒的晚期和极晚期基因转录水平变化与ie0基因完全缺失型病毒相一致,均显著低于野生型病毒,并且缺失锌指结构域编码序列的影响最为明显。MTT检测结果也显示ie0基因完全缺失后病毒对宿主细胞的致病能力有所下降。亚细胞定位显示IE0蛋白在细胞质、细胞核中均有分布,但主要位于细胞质。综上所述,ie0基因为BmNPV病毒增殖、基因组复制的非必需基因,但对病毒晚期和极晚期基因的转录具有调控作用,影响最为显著的为锌指结构域的编码序列,且该基因的缺失会导致病毒对宿主细胞的致病能力有所下降。 展开更多

关键词 家蚕核型多角体病毒 ie0基因 RED重组系统 缺失型病毒 基因功能

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杆状病毒早期启动子载体的构建及报道基因的表达 被引量：3

3

作者 邓小昭 朱反修 +2 位作者 刁振宇 高健 齐义鹏 《医学研究生学报》 CAS 2001年第3期200-203,,206,,共5页

目的 :用苜蓿尺蠖核多角体病毒 (Ac NPV)的 IE1基因启动子构建杆状病毒早期基因启动子载体。　方法 :以 Ac NPV p10基因为侧翼序列 ,并将新霉素抗性基因 (neo)插入 IE1基因启动子下游 ,得到转移载体 p Ac PIneo。将它和野生型 Ac NPV DN... 目的 :用苜蓿尺蠖核多角体病毒 (Ac NPV)的 IE1基因启动子构建杆状病毒早期基因启动子载体。　方法 :以 Ac NPV p10基因为侧翼序列 ,并将新霉素抗性基因 (neo)插入 IE1基因启动子下游 ,得到转移载体 p Ac PIneo。将它和野生型 Ac NPV DNA共转染昆虫细胞 Sf9,由于 neo基因的表达 ,通过 G418的选择和富集作用 ,得到重组病毒 v Ac PIneo的纯培养。　结果 :用酶切和 Southern印迹杂交证明 ,neo基因整合于 Ac NPV基因组的 p10基因位相。　结论 :成功地构建了杆状病毒早期启动子载体 。 展开更多

关键词 昆虫杆状病毒 ie1基因 p10基因 转移载体 新霉素抗性基因

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HCMV IE86对恶性胶质瘤细胞凋亡及p53表达活性的影响 被引量：1

4

作者 刘婷 钱冬萌 +5 位作者 胡明 于淼 张现娟 秦子英 刘小可 王斌 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期44-49,共6页

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)能诱导肿瘤细胞恶性转化且抑制肿瘤细胞凋亡,但HCMV编码的主要即刻早期调控蛋白IE86在这一过程中是否发挥关键作用仍然未知。为探究IE86对基因修饰荷胶质瘤小鼠p53表达水平及恶性胶质瘤细胞凋... 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)能诱导肿瘤细胞恶性转化且抑制肿瘤细胞凋亡,但HCMV编码的主要即刻早期调控蛋白IE86在这一过程中是否发挥关键作用仍然未知。为探究IE86对基因修饰荷胶质瘤小鼠p53表达水平及恶性胶质瘤细胞凋亡情况的影响,本研究通过PCR技术鉴定基因修饰小鼠IE86表达情况;实时定量PCR技术检测IE86和p53mRNA表达水平变化;免疫组织化学方法检测p53和p21蛋白的表达水平;TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况。结果显示,成功构建了IE86基因修饰小鼠模型;与IE86阴性组相比IE86阳性组p53表达水平上升(P<0.05),但p21表达水平下降(P<0.05);IE86阳性组细胞抗凋亡能力增强(P<0.05)。以上结果表明,在基因修饰的小鼠中IE86持续表达但p53转录活性的指示标志p21下调,且IE86可提高恶性胶质瘤细胞抗凋亡能力。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 胶质瘤细胞UL261 ie86基因修饰小鼠 ie86 P53 p21 凋亡

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人巨细胞病毒感染及其IE86蛋白对ARPE-19细胞周期的影响 被引量：2

5

作者 刘海燕 王斌 +8 位作者 李玲 白志强 姜光域 王海涛 钱冬萌 赵巍 闫志勇 丁守怡 宋旭霞 《医学研究生学报》 CAS 2010年第5期452-455,共4页

目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMVIE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。于感染后第1... 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMVIE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。于感染后第1、2、3、4、5天收获细胞,RT-PCR方法检测HCMV IE mRNA的表达水平,用免疫荧光法检测细胞核内HCMV IE蛋白的表达,Western blot法检测HCMV早期蛋白IE和晚期蛋白pp65的表达。采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因的表达。流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 HCMV IE72、IE86和pp65可分别在病毒感染ARPE-19细胞后第2、3和5天时检测到表达,流式细胞术示感染组在感染第3、4、5天细胞周期的S期细胞比例显著增高,与对照组比较差异均有显著性统计学意义,P(0.05。瞬时转染质粒pEGFP-N3-IE2后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高。结论 ARPE-19是HCMV的允许细胞,HCMV可引起ARPE-19细胞周期的改变,这种变化与IE2基因的表达有一定的关系。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 ARPE-19 ie2基因 细胞周期

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IE72在人巨细胞病毒感染中的作用 被引量：1

6

作者 刘玲玲(综述) 方峰(审校) 《国际病毒学杂志》 2011年第3期83-85,共3页

我国是HCMV感染高发地区，其中儿童血清抗HCMV抗体阳性率为83．2％～87．3％，而成人则高达95％。HCMV是一种弱的致病因子，但是先天感染、免疫力低下的婴幼儿可产生胎儿小头畸形、先天智力障碍及神经性耳聋等临床症状，器官移植、长期... 我国是HCMV感染高发地区，其中儿童血清抗HCMV抗体阳性率为83．2％～87．3％，而成人则高达95％。HCMV是一种弱的致病因子，但是先天感染、免疫力低下的婴幼儿可产生胎儿小头畸形、先天智力障碍及神经性耳聋等临床症状，器官移植、长期使用免疫抑制剂的个体及AIDS患者则可产生严重的临床综合症。明确IE72的作用机制则可在早期对HCMV感染进行干预，改善预后。 展开更多

关键词 HCMV感染 ie72基因 ie72蛋白

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质粒介导的RNAi技术对截短HCMV IE2基因表达的抑制作用 被引量：1

7

作者 高荣保 胡勇 王明丽 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期593-597,共5页

目的应用质粒介导的RNA干扰技术研究siRNA抑制截短HCMV IE2基因的表达的作用。方法以pLL3．7质粒为模板,采用半套式PCR的方法扩增出含U6启动子的siRNA表达片段,连接pMD-T simple vector构建效应质粒表达重组体pMD-T-shRNAR1和pMD-T-shRN... 目的应用质粒介导的RNA干扰技术研究siRNA抑制截短HCMV IE2基因的表达的作用。方法以pLL3．7质粒为模板,采用半套式PCR的方法扩增出含U6启动子的siRNA表达片段,连接pMD-T simple vector构建效应质粒表达重组体pMD-T-shRNAR1和pMD-T-shRNAR2。同时采用RT- PCR方法从HCMV AD169株基因组中调取目的截短基因IE2,定向克隆到带有绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因的真核表达载体pEGFP-C1上,构建HCMV AD169株截短IE2基因重组表达质粒pEGFP- C1-IE2;用脂质体共转染效应质粒和靶基因表达重组体至Hep-2细胞中,荧光显微镜下观察效应质粒的RNA干涉作用,并观察RNA干扰的时效和量效改变。结果三组质粒重组体构建成功,克隆到的2个shRNA表达载体对截短IE2基因的表达都有干涉作用。在与靶基因质粒量比为1:1和1:2时,其中pMD-T-shRNAR1 48～72 h间干涉效应为100％,可完全封闭IE2的表达;pMD-T-shRNAR2使IE2处于极低水平表达,48-72 h间干涉效应达到98．4％～99％。结论通过质粒介导的RNAi技术能够有效地抑制HCMV IE2基因的表达,为治疗HCMV感染的药物开发提供了思路。 展开更多

关键词 载体介导RNA干涉 人巨细胞病毒 截短ie2基因 绿色荧光蛋白 转染

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苏云金芽胞杆菌cry1Ie新基因的克隆、表达与生物活性测定 被引量：1

8

作者 余宗兰 贺利业 +3 位作者 龚莉 黄刚辉 李平 郑爱萍 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期201-206,共6页

为获得新的鳞翅目害虫杀虫基因,根据已知cry1I类基因编码区设计简并引物,采用直接克隆法,以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株BN23-5质粒DNA为模板进行扩增,并对得到的基因进行鉴定和分析。结果表明:克隆得到一个完整的cry... 为获得新的鳞翅目害虫杀虫基因,根据已知cry1I类基因编码区设计简并引物,采用直接克隆法,以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株BN23-5质粒DNA为模板进行扩增,并对得到的基因进行鉴定和分析。结果表明:克隆得到一个完整的cry1Ie基因,全长2 160 bp,由719个氨基酸组成,该氨基酸序列与已知的4种Cry1Ie蛋白不同,与Cry1Ie2和Cry1Ie3的氨基酸序列同源性最高,为95.4%,被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为Cry1Ie5(登录号为KJ710646)。将该基因插入表达载体p ET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG低温诱导成功表达,SDS-PAGE电泳验证其大小为81 k D,与预测的分子量相符合。生物活性测定表明,Cry1Ie5表达的包涵体蛋白对小菜蛾和亚洲玉米螟具有杀虫活性,LC_(50)分别为0.43μg/m L和48.39μg/m L;对棉铃虫的致死率不高,但能明显抑制其生长;对甜菜夜蛾没有杀虫活性。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 cry1ie5基因 鳞翅目害虫 克隆

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伪狂犬病病毒IE180基因的研究进展 被引量：1

9

作者 张传斌 颜其贵 +1 位作者 郭万柱 欧洋 《中国动物保健》 2005年第11期30-32,共3页

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)是疱疹病毒科a疱疹病毒亚科的成员,临床上引起Au-jeszky氏病(Aujeszky's disease,AD)。根据该病毒感染细胞后DNA转录、表达时间的先后可将PRV基因分为立即早期基因(immediate-early gene,IE),... 伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)是疱疹病毒科a疱疹病毒亚科的成员,临床上引起Au-jeszky氏病(Aujeszky's disease,AD)。根据该病毒感染细胞后DNA转录、表达时间的先后可将PRV基因分为立即早期基因(immediate-early gene,IE),早期基因(early gene)和晚期基因(late gene),这3种基因产物以瀑布方式调节。现已证实伪狂犬病病毒只含一个立即早期基因——IE180基因,该基因对病毒在动物体内的复制至关重要,只有IE180基因开放转录、并翻译成IE180蛋白,其下游的基因才能在IE180蛋白的激活作用下得以完全开放转录,否则病毒复制将不能完成。IE180基因的表达产物IE180蛋白是一个多功能蛋白,不仅能激活同源蛋白基因启动子,而且能激活某些异源蛋白基因启动子。此外,IE180蛋白还具有诱导机体产生免疫保护的功能。IE180的转基因小鼠能够抵抗PRV的攻击,但最近发现IE180在小鼠体内的表达会导致小鼠小脑发育异常,表现出共济失调、震颤等症状。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 ie180基因

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对虾白斑综合症病毒IE1基因表达与鉴定

10

作者 高溳 金春英 王蔚 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期535-536,共2页

目的探讨对虾白斑综合症病毒极早期基因IE1原核表达载体的构建与表达。方法将IE1编码序列克隆入pGEX-4T-2原核表达载体,并转染大肠埃希菌BL21,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导谷胱甘肽硫转移酶(GST-IE1)融合蛋白表达,亲和层析法纯化... 目的探讨对虾白斑综合症病毒极早期基因IE1原核表达载体的构建与表达。方法将IE1编码序列克隆入pGEX-4T-2原核表达载体,并转染大肠埃希菌BL21,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导谷胱甘肽硫转移酶(GST-IE1)融合蛋白表达,亲和层析法纯化,并用聚丙烯酰胺变性凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(western b lot)对融合蛋白进行鉴定。结果克隆到IE1基因序列长675 bp,编码224个氨基酸,理论分子量为25 kDa,等电点为4.87,所构建的重组体经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符,SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希氏菌BL21中表达成功。结论克隆构建了对虾白斑综合症病毒极早期基因IE1,并在原核细胞中获得表达。 展开更多

关键词 白斑综合症病毒 ie1基因 极早期蛋白

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人巨细胞病毒感染后平滑肌细胞即刻早基因及晚期基因表达与调控 被引量：1

11

作者 姚磊 何作云 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第22期3327-3329,共3页

目的通过检测体外培养平滑肌细胞(SMCs)感染人类巨细胞病毒(HCMV)后即刻早期(IE)基因及晚期(L)基因的表达与调控,探讨HCMV感染致动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法应用PCR方法,在SMCs感染HCMV后不同时相点,检测IE基因、L基因的DNA,同时... 目的通过检测体外培养平滑肌细胞(SMCs)感染人类巨细胞病毒(HCMV)后即刻早期(IE)基因及晚期(L)基因的表达与调控,探讨HCMV感染致动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法应用PCR方法,在SMCs感染HCMV后不同时相点,检测IE基因、L基因的DNA,同时应用反义寡核苷酸及丙氧鸟苷作用于感染细胞,动态观测其对IE基因、L基因的抑制作用。结果 感染细胞12 h即可检测到IE基因,24 h可同时检测到IE基因和L基因,48和72 h只能检测到L基因。丙氧鸟苷作用后,IE基因和L基因相对减弱。而反义硫代寡核苷酸(ASON)作用后,IE基因明显受到抑制,L基因减弱明显。结论 SMCs感染后IE基因、L基因的表达与调控可能在HCMV致AS的发病机制及其治疗中具有重要意义。 展开更多

关键词 平滑肌细胞 巨细胞病毒 ie基因 L基因 动脉粥样硬化

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转cry1Ie基因抗虫玉米对田间节肢动物群落多样性的影响 被引量：21

12

作者 郭井菲 张聪 +2 位作者 袁志华 何康来 王振营 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期482-489,共8页

为评价转cry1Ie基因(IE09S034转化体)抗虫玉米对田间节肢动物群落的影响,采用直接观察、地面陷阱、吸虫器和空中水盆诱捕4种方法,连续2年调查了转cry1Ie基因抗虫玉米田和非转基因对照玉米田在自然条件下的节肢动物物种数和个体数,比较... 为评价转cry1Ie基因(IE09S034转化体)抗虫玉米对田间节肢动物群落的影响,采用直接观察、地面陷阱、吸虫器和空中水盆诱捕4种方法,连续2年调查了转cry1Ie基因抗虫玉米田和非转基因对照玉米田在自然条件下的节肢动物物种数和个体数,比较分析了节肢动物群落各特征参数。结果显示,2012年依次采用此4种方法调查转cry1Ie基因抗虫玉米与非转基因对照玉米田间的节肢动物群落物种数、Simpson优势集中性指数、Shannon-Wiener多样性指数、Pielou均匀度指数分别为29.1、0.7、2.6、0.5,12.6、0.6、2.2、0.6,13.7、0.9、3.1、0.9和6.7、0.4、1.3、0.5,各参数之间均无显著差异。2013年调查结果与2012年一致,也显示2种玉米田的节肢动物群落各特征参数之间均无显著差异。表明转cry1Ie抗虫玉米对田间节肢动物群落多样性无显著影响。 展开更多

关键词 转基因抗虫玉米 Bt-cry1ie基因 节肢动物 群落多样性

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转Bt cry1Ah/cry1Ie双价基因抗虫玉米的研究 被引量：13

13

作者 杨召军 郎志宏 +3 位作者 张杰 宋福平 何康来 黄大昉 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期39-45,共7页

构建了含有人工改造的抗虫基因Bt cry1Ah、cry1Ie和耐除草剂基因2mG2-epsps的植物表达载体pMUHUESGM,利用基因枪法将表达盒片段转化玉米愈伤组织,以2mG2-epsps基因为筛选标记基因,经草甘膦异丙胺盐筛选获得24株T0代再生植株,其中PCR检... 构建了含有人工改造的抗虫基因Bt cry1Ah、cry1Ie和耐除草剂基因2mG2-epsps的植物表达载体pMUHUESGM,利用基因枪法将表达盒片段转化玉米愈伤组织,以2mG2-epsps基因为筛选标记基因,经草甘膦异丙胺盐筛选获得24株T0代再生植株,其中PCR检测阳性植株有20株。T0和T1代植株的分子检测结果证明了外源基因已经整合到玉米基因组中并能够稳定遗传和表达,转基因株系在田间生物活性检测中表现出较好的抗虫性,这为培育抗虫玉米新品种提供了参考,同时本研究中采用了基因枪片段转化法,提高了转基因的生物安全性。 展开更多

关键词 BT cry1Ah基因 Btcry1ie基因 2mG2-epsps基因 转基因玉米

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ie-1和lef-1基因dsRNA表达元件转染及转化细胞对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制 被引量：7

14

作者 薛仁宇 曹广力 +3 位作者 王崇龙 刘波 沈卫德 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期250-256,共7页

通过RNAi介导可以抑制病毒增殖,将相应的RNAi元件通过转基因转入宿主有可能使宿主对病毒产生一定的抗性。根据家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组中的病毒复制必需基因ie-1、lef-1设计相应的RNA干扰区段,并构建相应的转基因载体转入家蚕Bm... 通过RNAi介导可以抑制病毒增殖,将相应的RNAi元件通过转基因转入宿主有可能使宿主对病毒产生一定的抗性。根据家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组中的病毒复制必需基因ie-1、lef-1设计相应的RNA干扰区段,并构建相应的转基因载体转入家蚕BmN细胞中,瞬时表达结果显示转染了转基因RNAi载体的BmN细胞均对BmNPV有一定的抑制作用。IE dsRNA在病毒滴度为10-4时有抑制作用,在病毒滴度为10-5时有比较好的作用;LEF dsRNA则在病毒滴度为10-5时有抑制作用,在病毒滴度为10-6时有较好的抑制作用。通过转基因及G418筛选后,转基因IE dsRNA细胞在病毒滴度为10-4显示出一定的抑制作用,在病毒滴度为10-5表现了明显的抑制作用;而转基因LEF dsRNA细胞在病毒滴度为10-5有一定的抑制作用,但只维持了一个时段。 展开更多

关键词 RNA干扰 转基因 家蚕核型多角体病毒 家蚕细胞 ie-1基因 lef-1基因

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杆状病毒反式激活蛋白IE-1诱导昆虫细胞凋亡及几种抑制剂对AcNPV诱导细胞凋亡的影响 被引量：6

15

作者 杜昌升 彭建新 洪华珠 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期69-73,共5页

为了探讨杆状病毒诱导细胞凋亡的机制 ,用含AcNPV - ie- 1基因的重组质粒 pGAM -ie- 1转染斜纹夜蛾细胞SL - 1和粉纹夜蛾细胞Tn - 5B1。转染后 2 4h通过光镜观察、DAPI荧光染料染色、DNA琼脂糖凝胶电泳等发现 ,SL - 1发生了典型的凋亡 ... 为了探讨杆状病毒诱导细胞凋亡的机制 ,用含AcNPV - ie- 1基因的重组质粒 pGAM -ie- 1转染斜纹夜蛾细胞SL - 1和粉纹夜蛾细胞Tn - 5B1。转染后 2 4h通过光镜观察、DAPI荧光染料染色、DNA琼脂糖凝胶电泳等发现 ,SL - 1发生了典型的凋亡 ,而同样的现象并没有在Tn - 5B1细胞中出现。利用放线菌酮 (cycloheximide,CHX)、莫能菌素 (Monensin)及蚜栖菌素 (aphidicolin)处理AcNPV感染的SL - 1细胞 ,发现细胞凋亡被莫能菌素及蚜栖菌素抑制 ,被放线菌酮推迟。此结果为进一步研究杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡的机制等奠定了基础。 展开更多

关键词 杆状病毒 斜纹夜蛾细胞系 细胞凋亡 梯形带 ie-1基因 转染

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转cry1Ie基因抗虫玉米IE09S034种植对田间大型土壤动物多样性的影响 被引量：8

16

作者 刘新颖 王柏凤 +2 位作者 周琳 冯树丹 宋新元 《作物杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期62-68,共7页

选取我国具有自主知识产权的转cry1Ie基因抗虫玉米IE09S034,利用手捡法和巴氏罐诱捕法,以群落组成、群落结构、优势类群种群动态为参数,研究转基因玉米IE09S034对田间大型土壤动物多样性的影响。研究结果表明,转基因玉米IE09S034较非转... 选取我国具有自主知识产权的转cry1Ie基因抗虫玉米IE09S034,利用手捡法和巴氏罐诱捕法,以群落组成、群落结构、优势类群种群动态为参数,研究转基因玉米IE09S034对田间大型土壤动物多样性的影响。研究结果表明,转基因玉米IE09S034较非转基因对照综31,对田间大型土壤动物的群落组成、物种丰富度、Shannon-Wiener多样性指数、Pielou均匀度指数以及优势类群种群动态等均无显著影响,可初步认定转基因抗虫玉米IE09S034对田间大型土壤动物无安全性风险。 展开更多

关键词 转基因玉米 土壤动物 Bt-cry1ie基因 群落多样性

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转cry1Ie基因玉米残体对赤子爱胜蚓的生长发育及体内酶活性的影响 被引量：4

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作者 崔蕾 白树雄 +3 位作者 张天涛 刘允军 何康来 王振营 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期466-471,共6页

转Bt基因抗虫玉米通过根系分泌物或植株残体降解等方式将植株表达的Bt杀虫蛋白释放到土壤中。本文通过在人工土壤中添加磨碎的转cry1Ie基因玉米植株残体来饲养赤子爱胜蚓Eisenia foetida,研究了转cry1Ie基因玉米植株残体对赤子爱胜蚓生... 转Bt基因抗虫玉米通过根系分泌物或植株残体降解等方式将植株表达的Bt杀虫蛋白释放到土壤中。本文通过在人工土壤中添加磨碎的转cry1Ie基因玉米植株残体来饲养赤子爱胜蚓Eisenia foetida,研究了转cry1Ie基因玉米植株残体对赤子爱胜蚓生长发育及体内酶活性的影响。结果显示,在63 d的试验中,添加转cry1Ie基因玉米植株残体处理组没有引起赤子爱胜蚓的死亡。5个处理组与对照组中每7 d的蚯蚓体重、产茧数量、茧孵化数量均没有显著差异。SOD酶和POD酶活力随Bt玉米植株残体组织含量的增加而增加,50B+0N(50 g Bt/500 g土壤)处理组中SOD酶和POD酶活力要显著高于0B+50N(50 g non-Bt/500 g土壤)对照组。因此,Bt玉米植株残体可以在7 d时诱导赤子爱胜蚓SOD酶和POD酶活性。但5个处理组与对照组中赤子爱胜蚓的总蛋白含量、AChE和CAT酶活力没有显著的差异。 展开更多

关键词 转cry1ie基因玉米 赤子爱胜蚓 生长发育 酶活性

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柞蚕核型多角体病毒ie-2和pe-38基因的克隆与序列分析 被引量：1

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作者 李卫国 夏爱华 +2 位作者 张志芳 李季生 牟志美 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期193-198,共6页

采用随机克隆方法,通过对插入pGEM-3Z载体的柞蚕核型多角体病毒基因组的部分片段进行测序和序列分析,获得了柞蚕核型多角体病毒基因组的2个极早期基因ie-2和pe-38的序列及pe-38的5′启动子区,其推定的开放阅读框分别编码295和302个氨基... 采用随机克隆方法,通过对插入pGEM-3Z载体的柞蚕核型多角体病毒基因组的部分片段进行测序和序列分析,获得了柞蚕核型多角体病毒基因组的2个极早期基因ie-2和pe-38的序列及pe-38的5′启动子区,其推定的开放阅读框分别编码295和302个氨基酸,并且内部含有一个保守的锌指结构和亮氨酸拉链。核苷酸和氨基酸同源性比较结果显示:柞蚕核型多角体病毒的ie-2和pe-38基因与黄杉毒蛾多角体病毒的同源性较高,与家蚕核型多角体病毒的同源性都很低;在分子进化方面,这2个基因的保守性不强,出现大片段缺失,是研究分子进化及物种关系比较典型的基因。 展开更多

关键词 柞蚕核型多角体病毒 ie-2基因 pe-38基因 序列分析

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家蚕核型多角体病毒ie-2基因dsRNA表达载体的构建 被引量：1

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作者 杨金宏 卢从德 +1 位作者 王代刚 孔卫青 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期23-26,共4页

为了研究ie-2基因的dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果,根据NCBI公布的BmNPV(T3株)基因组序列,克隆了BmNPV极早期表达因子ie-2.将该基因用亚克隆的方法导入到L4440载体中构建L4440-ie-2,并成功转入大肠杆菌HT115(DE3).IPTG诱导... 为了研究ie-2基因的dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果,根据NCBI公布的BmNPV(T3株)基因组序列,克隆了BmNPV极早期表达因子ie-2.将该基因用亚克隆的方法导入到L4440载体中构建L4440-ie-2,并成功转入大肠杆菌HT115(DE3).IPTG诱导可以成功表达相应的dsRNA. 展开更多

关键词 家蚕核型多角体病毒 双链RNA ie-2基因

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诱导表达极早期基因ie-1反义序列抑制杆状病毒复制的试验

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作者 刘子瑜 车凤玉 +3 位作者 张业顺 夏定国 张国政 韦亚东 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期850-855,共6页

在昆虫杆状病毒的级联复制中,极早期基因ie-1所编码的IE-1蛋白具有重要功能,其中极晚期多角体蛋白基因启动子polh受其调控激活。通过建立具有启动子polh及ie-1长194 bp的反义序列(ie-1-r)的转录载体,使杆状病毒在宿主细胞进行自身复制... 在昆虫杆状病毒的级联复制中,极早期基因ie-1所编码的IE-1蛋白具有重要功能,其中极晚期多角体蛋白基因启动子polh受其调控激活。通过建立具有启动子polh及ie-1长194 bp的反义序列(ie-1-r)的转录载体,使杆状病毒在宿主细胞进行自身复制时受到抑制。试验结果表明,当转入重组转录载体polh/ie-1-r的宿主细胞受携带荧光素酶(luciferase)基因的杆状病毒感染时,能够被诱导激活细胞内多角体蛋白基因启动子转录其携带的ie-1的反义序列RNA,从而部分抑制病毒本身的复制,宿主细胞在病毒感染第4～5天,其荧光素含量与对照RLU(relative light unit)相比下降约1×108个单位,抑制病毒的效果在时间上呈现一定的滞后性。试验结果提示:构建类似的病毒诱导表达系统,通过早期基因激活晚期基因,晚期基因转录抑制早期基因表达的策略,可以对病毒复制进行抑制。 展开更多

关键词 多角体蛋白基因启动子 ie-1基因 反义序列 病毒复制 抑制

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