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贵州省2009年手足口病流行病学分析 被引量:42
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作者 阎岩 王定明 +3 位作者 胡静 田克诚 庄丽 蒋维佳 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期370-371,共2页
手足口病是由多种肠道病毒引起的常见传染病,以婴幼儿发病为主。大部分患者症状轻微,以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。少数患者可并发脑膜炎、脑炎、急性迟缓性麻痹、呼吸道感染、心肌炎,个别重症患儿可发生死亡。... 手足口病是由多种肠道病毒引起的常见传染病,以婴幼儿发病为主。大部分患者症状轻微,以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。少数患者可并发脑膜炎、脑炎、急性迟缓性麻痹、呼吸道感染、心肌炎,个别重症患儿可发生死亡。重症病例主要是肠道病毒71型(EV71)感染,也有报道感染柯萨奇病毒A组16型等引起的死亡。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71 vp1基因
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鹅和番鸭细小病毒全基因克隆与序列分析 被引量:39
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作者 张云 耿宏伟 +5 位作者 郭东春 胡奇林 相文华 刘明 杨涛 林巍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期415-419,共5页
本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别... 本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.9%~82.9%和89.5%~91.2%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为93.7%~99.8%和96.8%~99.7%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.8%~99.8%和98.6%~99.5%;在核苷酸和氨基酸水平上,鹅和番鸭细小病毒VP1之间的同源性分别为79.7%~88.7%和85.5%~93.3%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为88.8%~99.6%和91.5%~99.2%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.1%~99.6%和97.1%~98.8%;番鸭和鹅细小病毒NS和vp1基因的系统进化树分析表明:番鸭和鹅呼细小病毒来自共同的祖先,但随着宿主的不同而演化为不同的分支。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 NS基因 vp1基因 序列分析
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2013~2014年杭州地区手足口病柯萨奇病毒A6型和A10型VP1基因特征分析 被引量:37
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作者 谢国良 崔大伟 +3 位作者 郑书发 杨先知 余斐 陈瑜 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2015年第12期938-941,共4页
目的了解2013-2014年杭州地区手足口病病原谱的分布,并对其病原基因特征进行分析。方法采集2013年3月至2014年4月手足口病患儿标本1 340例,提取病毒核酸,通过逆转录和PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型。对柯萨... 目的了解2013-2014年杭州地区手足口病病原谱的分布,并对其病原基因特征进行分析。方法采集2013年3月至2014年4月手足口病患儿标本1 340例,提取病毒核酸,通过逆转录和PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型。对柯萨奇病毒A6型(CA-A6)和A10型(CA-A10)VP1全长序列进行同源性比对分析,并构建系统进化树。结果1 340例手足口病患儿标本中,肠道病毒检出阳性率为81.43%(1 090/1 340)。其中,CV-A6阳性率为41.04%,取代EV-71(14.48%)成为杭州地区检出阳性率最高的肠道病毒;CV-A10检出率(8.51%)也高于CV-A16(3.81%),列于第三位。同源性比对及系统进化分析显示,2013-2014年的25株CV-A6病毒核苷酸同源性为89.0%-99.7%,主要分布于G、H基因亚型;15株CV-A10病毒核苷酸同源性为95.3%-99.9%,分布于F、G基因亚型。结论 2013-2014年杭州地区儿童手足口病的主要病原体发生重大变化,CV-A6病毒成为最主要病原,CV-A10病毒也存在潜在威胁,需加强对其他肠道病毒的持续监测和分子特征分析。 展开更多
关键词 手足口病 柯萨奇病毒A6型 柯萨奇病毒A10型 vp1基因 基因特征
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肠道病毒ECHO_(13)中国分离株的基因特征 被引量:27
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作者 毛乃颖 许文波 +4 位作者 杨秀惠 刘中华 严延生 潘伟毅 张勇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期308-314,共7页
为研究ECHO13病毒中国分离株的分子特征及其与世界其它分离株之间的基因关系,对1998年、2000年从中国福建省分离到2株ECHO13病毒进行基因序列对比分析。2株病毒分别命名为Fujian98-1和Fujian00-1,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出VP... 为研究ECHO13病毒中国分离株的分子特征及其与世界其它分离株之间的基因关系,对1998年、2000年从中国福建省分离到2株ECHO13病毒进行基因序列对比分析。2株病毒分别命名为Fujian98-1和Fujian00-1,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出VP1蛋白编码基因全长861个核苷酸片段并进行序列测定,将2株E CHO13病毒的VP1序列与所有已发表的ECHO13病毒VP1基因全长进行同源性比较。结果显示,福建分离株之间核苷酸同源性为79 6%,氨基酸同源性为93 4%;与遗传距离最近的法国CF1089-91(AJ537604)毒株的核苷酸同源性分别为80%和88%,与代表株DelCarmen的核苷酸同源性分别为75 8%和77 9%。通过VP1基因分析,福建2株病毒均属于ECHO13病毒,与血清中和试验鉴定结果一致。下载所有已发表的ECHO13病毒VP1序列并构建进化树,发现福建2株病毒分属不同的分枝,提示这2株病毒来自不同的病毒传播链。进一步分析发现,整个E CHO13病毒可划分为3个不同的基因型:A、B和C基因型。福建Fujian98-1和Fujian00-1分别被划分在基因型B和C中,各基因型之间的核苷酸差异均大于20%。为验证该分型方法,将26株来自不同国家和时间的ECHO13病毒和2株福建分离ECHO13病毒部分VP1基因序列进行对比分析,建立进化树。结果显示,所有ECHO13病毒被分在A。 展开更多
关键词 肠道病毒 核苷酸 基因 vp1基因 C基因 中国分离株 对比分析 同源性 遗传距离 划分
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鸭病毒性肝炎病毒VP1基因表达及其抗体检测ELISA方法的建立 被引量:21
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作者 马秀丽 宋敏训 +2 位作者 于可响 廖明 辛朝安 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1110-1114,共5页
【目的】研究DHV VP1基因在大肠杆菌中的表达,并以纯化的重组蛋白为抗原建立鸭病毒性肝炎抗体检测ELISA方法。【方法】采用RT-PCR技术,扩增VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建DHV VP1基因克隆重组质粒。然后定向插入到pET-32a(+)表达载... 【目的】研究DHV VP1基因在大肠杆菌中的表达,并以纯化的重组蛋白为抗原建立鸭病毒性肝炎抗体检测ELISA方法。【方法】采用RT-PCR技术,扩增VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建DHV VP1基因克隆重组质粒。然后定向插入到pET-32a(+)表达载体,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行ITPG诱导表达分析。以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法并初步应用于临床。【结果】DHV VP1基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达。Western blot检测表明,表达的重组蛋白能与鸭肝炎阳性血清发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为5μg/孔,血清最佳稀释度为1∶100,临界值为OD450值≥0.302,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。通过对80份血清样品的检测表明,该方法与中和试验的符合率为97.5%,初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。【结论】以大肠杆菌表达的DHV VP1重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可用于鸭病毒性肝炎抗体的检测。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 vp1基因 表达 ELISA 抗体 检测
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2016年湖北省部分地区手足口病肠道病毒病原谱及柯萨奇病毒A6型和A10型基因特征分析 被引量:23
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作者 李静 张婷 +2 位作者 邹文菁 杨朝晖 占建波 《疾病监测》 CAS 2017年第6期462-466,共5页
目的了解2016年湖北省部分地区手足口病病原谱特征,对其中的柯萨奇病毒A组6型(Cox A6)和A组10型(Cox A10)基因特征进行分析。方法采集2016年湖北省部分地区手足口病患者阳性标本,提取病毒核酸,通过一步法反转录-PCR扩增肠道病毒VP1序列... 目的了解2016年湖北省部分地区手足口病病原谱特征,对其中的柯萨奇病毒A组6型(Cox A6)和A组10型(Cox A10)基因特征进行分析。方法采集2016年湖北省部分地区手足口病患者阳性标本,提取病毒核酸,通过一步法反转录-PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型。对其中Cox A6和Cox A10的VP1全长序列进行同源性和系统进化分析。结果病原学监测结果显示,肠道病毒71型(EV71)阳性率为29.4%(599/2 035),柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)阳性率为25.7%(522/2 035),其他肠道病毒阳性率为44.9%(914/2 035)。对该地区收集的83份肠道通用阳性的非EV71和非Cox A16进行病毒分型分析,Cox A6阳性检出率为56.6%(47/83),Cox A10阳性检出率为22.9%(19/83),还检测出其他肠道病毒如Cox A2(2株)、Cox A4(7株)、CB4(2株)、CB5(2株)、CB6(1株)、Echo5(1株)、Echo9(1株)和Echo25(1株)。对Cox A6和Cox A10的VP1基因同源性比对及系统进化分析显示,2016年湖北省22株Cox A6的VP1基因核苷酸同源性为95.1%~100.0%,11株Cox A10的VP1基因核苷酸同源性为95.2%~100.0%。我国与其他国家Cox A6和Cox A10可分别划分为8个(A^H)和7个基因谱系(A^G)。湖北省Cox A6与我国其他Cox A6位于H基因谱系上;湖北省Cox A10与我国其他Cox A10位于G基因谱系上。结论 2016年湖北省部分地区手足口病病原体除了EV71和Cox A16两种主要病毒外,还检测出Cox A6和Cox A10等手足口病的病原。其他肠道病毒中以Cox A6和Cox A10为主,仍需进一步加强对其他肠道病毒的监测和分子流行病学特征的分析。 展开更多
关键词 手足口病 柯萨奇病毒A组6型 柯萨奇病毒A组10型 vp1基因 基因特征
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福建省2011年病毒性脑炎暴发病原Echo30分子流行病学分析 被引量:22
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作者 杨秀惠 严延生 +6 位作者 翁育伟 何爱华 张红榕 陈炜 许江阳 林其财 周勇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期265-269,共5页
目的了解福建省2011年病毒性脑炎暴发的病原特点及福建省近10年Echo30分子流行病学特征。方法应用细胞培养法获得病毒株,微量血清中和试验或RT-PCR序列分析鉴定Echo30血清型,提取病毒RNA核酸,逆转录为cD-NA,分段扩增VP1基因序列全长,测... 目的了解福建省2011年病毒性脑炎暴发的病原特点及福建省近10年Echo30分子流行病学特征。方法应用细胞培养法获得病毒株,微量血清中和试验或RT-PCR序列分析鉴定Echo30血清型,提取病毒RNA核酸,逆转录为cD-NA,分段扩增VP1基因序列全长,测定并分析扩增产物的序列。结果 2011年4月1日-6月2日,从福建省4个县(市)区病毒性脑炎病例标本中分离的病毒经鉴定均为Echo30;VP1基因序列分析显示,泉州市安溪和德化两地流行株高度同源(核苷酸与氨基酸序列同源性分别为99.0%和99.6%),同福安和厦门流行株(核苷酸与氨基酸序列同源性分别为98.5%和100%)核苷酸差异约9%,3个位点氨基酸出现了变异。近10年福建省Echo30分子流行病学分析显示,2011年泉州流行株并非由2005年当地流行株进化而来,而与2008年河南省分离株(HQ625646-Henan/04/2008)同源性最高;近10年福建省Echo30存在多基因型、多谱系的同时传播,并在2006年发现了两株第III新基因型病毒。结论造成2011年福建省病毒性脑炎暴发的病原为Echo30,且至少存在两条不同传播链病毒同时流行。Echo30福建株呈多基因型、多谱系分布流行特点。 展开更多
关键词 病毒性脑炎 ECHO30 vp1基因 分子流行病学
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河南省2010年柯萨奇病毒A组16型VP1区基因特征分析 被引量:21
8
作者 许玉玲 卫海燕 +2 位作者 穆玉姣 黄学勇 许汴利 《中国病毒病杂志》 CAS 2011年第3期200-203,共4页
目的了解河南省2010年柯萨奇病毒A组16型(CA16)流行株VP1区基因特征。方法对河南省2010年手足口病(HFMD)粪便和咽拭子样品中分离到的10株CA16病毒,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行VP1编码区基因扩增,对扩增产物进行测序... 目的了解河南省2010年柯萨奇病毒A组16型(CA16)流行株VP1区基因特征。方法对河南省2010年手足口病(HFMD)粪便和咽拭子样品中分离到的10株CA16病毒,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行VP1编码区基因扩增,对扩增产物进行测序,利用生物信息学软件对序列分析,与已报道的CA16标准株序列构建基因亲缘关系树。结果 10株CA16毒株,其VP1区核苷酸和氨基酸同源性分别为90.9%-100.0%,99.3%-100.0%,与国际CA16标准株G10在VP1区核苷酸和氨基酸同源性分别为67.0%-69.0%,72.0%-74.0%。亲缘进化树显示全部CA16株可分为A和B两个基因型,B基因型又可分为B1和B2两个基因亚型。河南省分离的CA16毒株全部属于B1基因亚型,同时包含B1a和B1b两条进化分支在河南省共同流行。结论河南省手足口病感染CA16病毒的流行株属B1基因亚型,有B1a和B1b两个进化分支共同进化和循环。 展开更多
关键词 手足口病 柯萨奇病毒A组16型 vp1基因 基因
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番鸭细小病毒和鹅细小病毒广东株VP1基因的克隆与序列分析 被引量:17
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作者 季芳 张毓金 +1 位作者 杨增岐 宋长绪 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期245-247,251,共4页
参考GenBank中的MDPVFM株和GPVB株全基因序列 ,设计并合成一对引物 ,分别对MDPVGD株和GPVGD株的结构蛋白基因 (VP1)进行PCR扩增 ,并克隆到pMD18_T载体 ,筛选到重组质粒并测序。通过对MDPVGD株和GPVGD株的VP1基因的核苷酸序列分析 ,这两... 参考GenBank中的MDPVFM株和GPVB株全基因序列 ,设计并合成一对引物 ,分别对MDPVGD株和GPVGD株的结构蛋白基因 (VP1)进行PCR扩增 ,并克隆到pMD18_T载体 ,筛选到重组质粒并测序。通过对MDPVGD株和GPVGD株的VP1基因的核苷酸序列分析 ,这两种病毒VP1基因大小均为 2 199bp ,核苷酸序列同源性为 87% ,而位于VP1基因上的VP2至VP3基因起始密码子之间的核苷酸序列的差异较大 ,同源性仅为 6 4 %。另外对MDPVGD株和GPVGD株与各地方毒株的VP1和VP3基因核苷酸序列的同源性比较 。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 鹅细小病毒 vp1基因 基因克隆 序列分析 广东株
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2008-2009年广东手足口病非CAl6非EV71肠道病毒株的鉴定及其VPl基因分型研究 被引量:19
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作者 肖红 管大伟 +5 位作者 曾汉日 黎薇 苏娟 郑焕英 郭雪 刘冷 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期808-812,共5页
目的探讨2008-2009年广东省子足口痫非CAl6非EV71肠近、炳毒侏的流仃情况以及毒株型别。方法从2008-2009年广东省手足口病粪便样本中采用RD细胞和HEp-2细胞分离病毒毒株,待出现细胞病变后收集上清采用lit—PCR进行鉴定。非CAl6非EV71... 目的探讨2008-2009年广东省子足口痫非CAl6非EV71肠近、炳毒侏的流仃情况以及毒株型别。方法从2008-2009年广东省手足口病粪便样本中采用RD细胞和HEp-2细胞分离病毒毒株,待出现细胞病变后收集上清采用lit—PCR进行鉴定。非CAl6非EV71毒株再进行VPl测序分析,序列通过BLAST程序鉴定型别,用MEGA4.0软件进行基冈进化分析。结果共分离到22株非CAl6非EV71毒株,通过BLAST程序鉴定型别。2008年9株非CAl6、非EV71的毒株有CA2型、CA4、CB3型;2009年13株有EV80、E13、E30、CB5、E24、PVl、CAl0、CA6和CA2。各毒株间同源性低,各毒株分别归属CoxA、CoxB、埃叮肠道病毒、新型肠道病毒和脊灰病毒组。结论广东省2008--2009年两年来,手足口病除了CAl6和EV71占主导地位外,并不存在其他的优势株,其他型肠道病毒分布比较广,既有CoxA组病毒、CoxB组,也有E13、E24、E30、新型病毒EV80和脊髓灰质炎病毒PVl.几组病毒伴随流行。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒 vp1基因 分型
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2008年福建省肠道病毒71型分离株的遗传特征分析 被引量:16
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作者 杨秀惠 严延生 +6 位作者 周勇 陈前进 姚栩 刘建忠 何爱华 张红榕 许江阳 《海峡预防医学杂志》 CAS 2009年第6期4-7,共4页
[目的]分析福建省流行的肠道病毒71(Enterovirus71,EV 71)分离株的遗传特征。[方法]对2008年手足口病例(HFMD)EV 71分离株进行RT-PCR扩增全长VP1基因,测序并分析病毒遗传学特征。[结果]从福州、泉州及龙岩3地市散发的手足口病例中... [目的]分析福建省流行的肠道病毒71(Enterovirus71,EV 71)分离株的遗传特征。[方法]对2008年手足口病例(HFMD)EV 71分离株进行RT-PCR扩增全长VP1基因,测序并分析病毒遗传学特征。[结果]从福州、泉州及龙岩3地市散发的手足口病例中分离到8株EV 71,种系发生树显示2008年福建与阜阳分离株和中国大陆1998年以来的病毒株均为C4亚型,至少分为4个谱系(lineages)。8株福建分离株核苷酸与氨基酸同源性分别为97.4%-100%和99.3%-100%,与Genbank安徽阜阳的5株分离株病毒同源性最高,核苷酸与氨基酸序列同源性为97.6%-99.5%和96.4%-99.3%,其中福建株HF08-17、HS08-140与阜阳分离株同源性为99.2%-99.5%,为同一传播链上的病毒;福清市2分离株(HA08-68和HA08-69)以及长汀县3株(HA08-124,HS08-139和HS08-140)病毒间核苷酸差异性为2.1%-2.2%,说明同一地区存在不同传播链。[结论]2008年福建省EV 71分离株均属于C4亚型,C4亚型病毒在中国大陆具有多传播链、广泛快速传播的特点;福建省内存在亲缘关系较近的EV71多传播链病毒同时流行,应加强监测与分析。 展开更多
关键词 肠道病毒71 分子流行病学 遗传分析 vp1基因
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口蹄疫病毒VP1基因在番茄中的表达及转基因番茄对豚鼠诱导免疫保护 被引量:10
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作者 潘丽 张永光 +9 位作者 王永录 王宝琴 谢庆阁 方玉珍 王文秀 蒋守田 王炜 孙元 吕建亮 刘力宽 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期796-801,共6页
构建克隆有O型口蹄疫病毒China99株VP1基因的植物双元表达载体pBin438/VP1。通过农杆菌介导法转化番茄子叶,经卡那霉素抗性筛选,获得60株抗性植株。对抗性植株分别做PCR、RT-PCR检测目的基因的整合与转录,ELISA筛选约40%的卡那抗性植株... 构建克隆有O型口蹄疫病毒China99株VP1基因的植物双元表达载体pBin438/VP1。通过农杆菌介导法转化番茄子叶,经卡那霉素抗性筛选,获得60株抗性植株。对抗性植株分别做PCR、RT-PCR检测目的基因的整合与转录,ELISA筛选约40%的卡那抗性植株阳性,分别提取两株ELISA和Western blot检测阳性的转基因番茄叶片蛋白与弗氏佐剂乳化,于0、15、30d经肌肉途径免疫豚鼠,第三次免疫后28d用100ID50的同源强毒攻击,根据豚鼠抗体水平的消长动态和免疫豚鼠抗强毒攻击的保护率进行转基因植物疫苗免疫原性的评估。结果表明,双元表达载体pBin438/VP1构建正确,PCR、RT-PCR结果证实口蹄疫病毒VP1基因已整合到番茄基因组并在转录水平表达,ELISA和Western blot检测重组蛋白能够与FMDV阳性血清反应。转基因番茄第三次免疫豚鼠后21d血清效价最高可达1∶64,攻毒后两组免疫豚鼠保护率分别达80%和40%,证明转基因番茄表达的VP1蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1基因 基因番茄 豚鼠 免疫原性
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Ⅰ型鸭肝炎病毒R株VP1基因克隆与序列分析 被引量:11
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作者 罗玉均 张桂红 +3 位作者 陈建红 徐小芹 廖明 张济培 《广东畜牧兽医科技》 2007年第5期33-35,共3页
本研究克隆了DHVⅠ-R株VP1基因,分析其与目前GenBank上发表的DHVⅠVP1基因的遗传变异,发现DHVⅠ-R株与GenBank上发表的其他中国毒株VP1基因的核苷酸序列相似性92.2%~100%,而氨基酸序列相似性为95.0%~100%,变异程度不大。但各毒株的亲... 本研究克隆了DHVⅠ-R株VP1基因,分析其与目前GenBank上发表的DHVⅠVP1基因的遗传变异,发现DHVⅠ-R株与GenBank上发表的其他中国毒株VP1基因的核苷酸序列相似性92.2%~100%,而氨基酸序列相似性为95.0%~100%,变异程度不大。但各毒株的亲缘关系相差较大。 展开更多
关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 vp1基因 序列分析
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口蹄疫病毒VP1蛋白在酵母中的表达及免疫原性分析 被引量:10
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作者 金华利 张富春 +3 位作者 单文娟 张爱莲 李轶杰 王宾 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期513-516,共4页
目的 :利用毕赤酵母表达系统表达牛O型口蹄疫外壳蛋白(FMDVVP1) ,并对表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法 :将FMDVvp1基因克隆到毕赤酵母Pichiapastoris分泌性表达载体pSuperY中 ,构建重组表达载体pSuperY/vp1,经测序证明vp1基因序列的... 目的 :利用毕赤酵母表达系统表达牛O型口蹄疫外壳蛋白(FMDVVP1) ,并对表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法 :将FMDVvp1基因克隆到毕赤酵母Pichiapastoris分泌性表达载体pSuperY中 ,构建重组表达载体pSuperY/vp1,经测序证明vp1基因序列的正确性。将纯化的重组质粒经线性化酶切后 ,用电转化法将pSuperY/vp1导入毕赤酵母菌种SMD116 8H中。对表达产物用SDS PAGE和Westernblot进行分析 ,并用酵母表达的FMDVVP1蛋白免疫小鼠。结果 :以重组质粒pSuperY/vp1转化毕赤酵母菌后 ,能表达相对分子量 (Mr)为 6 6 0 0 0和4 30 0 0的FMDVVP1蛋白。动物免疫结果表明 ,FMDVVP1蛋白能诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。结论 :在毕赤酵母中成功地表达FMDVVP1蛋白 。 展开更多
关键词 蛋白 酵母表达 vp1 免疫原性 毕赤酵母菌 重组质粒 细胞免疫应答 口蹄疫病毒 vp1基因 FMDV
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鹅细小病毒VP1基因的克隆及序列分析 被引量:6
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作者 马波 王君伟 +1 位作者 李洪涛 刘宝全 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第12期7-10,共4页
参照GenBank中收录的鹅细小病毒 (GPV)B株基因序列设计并合成了扩增GPVH1株VP1的 1对引物 ,利用PCR技术扩增出长约 2 .2kb的目的片段 ,将其克隆到 pMD 18 T载体上 ,进行了序列测定及分析。测序结果表明 ,GPVH1株VP1基因由 2 199个核苷... 参照GenBank中收录的鹅细小病毒 (GPV)B株基因序列设计并合成了扩增GPVH1株VP1的 1对引物 ,利用PCR技术扩增出长约 2 .2kb的目的片段 ,将其克隆到 pMD 18 T载体上 ,进行了序列测定及分析。测序结果表明 ,GPVH1株VP1基因由 2 199个核苷酸组成 ,编码 732个氨基酸。经与B株、YG株进行同源性比较 ,核苷酸的同源性分别为 98.5 0 %和 93.18% ;推导的氨基酸同源性分别为 98.0 9%和 95 .77%。 展开更多
关键词 细小病毒 vp1基因 基因克隆 序列分析
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O型口蹄疫病毒VP1嵌合基因的构建及原核表达 被引量:11
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作者 郑敏 金宁一 +3 位作者 鲁会军 韩松 金扩世 李昌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期561-563,共3页
首先合成我国O型口蹄疫病毒2个疫苗毒株VP 1基因的3个抗原表位,与另外扩增的流行毒株VP 1基因末端273 bp片段相连,构建出O型VP 1嵌合基因片段(VP 1O)。然后,将VP 1O基因连接到原核表达载体pET 28a上,构建了重组表达质粒pET 28a-VP 1O,... 首先合成我国O型口蹄疫病毒2个疫苗毒株VP 1基因的3个抗原表位,与另外扩增的流行毒株VP 1基因末端273 bp片段相连,构建出O型VP 1嵌合基因片段(VP 1O)。然后,将VP 1O基因连接到原核表达载体pET 28a上,构建了重组表达质粒pET 28a-VP 1O,转化大肠杆菌BL 21(DE 3)进行诱导表达。SDS-PAGE电泳表明,VP 1O基因在大肠杆菌中获得表达。W estern b lotting检测证实表达的VP 1O蛋白具有良好的生物学活性。对表达蛋白通过包涵体洗涤的方法进行初步纯化,获得了较高纯度的VP 1O蛋白。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 O型 vp1基因 克隆 表达
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口蹄疫病毒VP1基因的原核表达及免疫原性检测 被引量:11
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作者 马静云 陈峰 +2 位作者 曹永长 周庆丰 毕英佐 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期17-20,共4页
将口蹄疫病毒VP1基因克隆至原核表达载体 pBAD/TOPO中 ,经鉴定后得到了重组质粒 pBAD VP1。将此重组质粒转化到受体菌TOP10中 ,分别以不同浓度的诱导剂L 阿拉伯醛糖进行诱导 ,并在不同诱导时间进行采样 ,经处理后做SDS PAGE和蛋白质印... 将口蹄疫病毒VP1基因克隆至原核表达载体 pBAD/TOPO中 ,经鉴定后得到了重组质粒 pBAD VP1。将此重组质粒转化到受体菌TOP10中 ,分别以不同浓度的诱导剂L 阿拉伯醛糖进行诱导 ,并在不同诱导时间进行采样 ,经处理后做SDS PAGE和蛋白质印迹分析。结果 ,以终浓度为 0 .0 2 g/L的L 阿拉伯醛糖进行诱导 ,4h后表达可达到高峰 ,表达产物大小约为 4 0ku。软件扫描结果显示 ,VP1融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的 2 6 .3% ,能与抗FMDV抗体发生特异性反应 ,融合蛋白以包涵体和可溶形式存在。抽提融合蛋白的包涵体 ,经过洗涤后制成油乳剂疫苗 ,经皮下注射免疫豚鼠 ,用乳鼠中和试验测定豚鼠血清中和指数 ,并用口蹄疫病毒对豚鼠进行攻毒。结果表明 ,用此融合蛋白的包涵体免疫豚鼠能诱导产生中和抗体 ,并对病毒的攻击提供免疫保护。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1基因 原核表达 免疫原性
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鸭肝炎病毒分子流行病学分析 被引量:14
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作者 袁率珍 范书才 +2 位作者 李虹 姜畔 张兵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期849-853,共5页
为了解我国鸭病毒性肝炎(DH)的流行情况,本研究用标准DH病毒(DHV)Ⅰ型(DHV-1)抗血清和新型DHV(N-DHV)抗血清对国内分离的7株DHV进行了血清中和试验。结果表明,PLK株和YB3株为DHV-1;YB1、YB2、YB5、HY2和HY3株为N-DHV。同时,对国内分离的... 为了解我国鸭病毒性肝炎(DH)的流行情况,本研究用标准DH病毒(DHV)Ⅰ型(DHV-1)抗血清和新型DHV(N-DHV)抗血清对国内分离的7株DHV进行了血清中和试验。结果表明,PLK株和YB3株为DHV-1;YB1、YB2、YB5、HY2和HY3株为N-DHV。同时,对国内分离的9株病毒的抗原相关VP1基因进行RT-PCR扩增和测序,对VP1基因的核苷酸与推导的氨基酸序列分析的结果表明,3株DHV-1的氨基酸序列同源性为95%左右,6株N-DHV的氨基酸同源性为98%左右;DHV-1分离株与N-DHV分离株间氨基酸同源性为72%~77%。参照同属微RNA病毒的人肠病毒的血清型分型标准,通过对DHV VP1基因序列同源性比较,判定9株病毒的血清型。依据VP1基因序列同源性进行的血清型分型结果与根据抗原性鉴定进行的血清型分型结果一致。同血清型病毒株间的VP1基因变异很小,表明DHV的抗原性稳定。同型不同毒株间VP1基因的差异可以导致病毒在致病力、细胞感染能力等方面的差异。研究结果表明,目前我国存在DHV-1和N-DHV两种独立的血清型,但尚未见血清亚型的流行。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 vp1基因 序列分析
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Genetic Variation of the VP1 Gene of the Virulent Duck Hepatitis A Virus Type 1(DHAV-1) Isolates in Shandong Province of China 被引量:13
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作者 Jiming Gao Junhao Chen +5 位作者 Xingkui Si Zhijing Xie Yanli Zhu Xingxiao Zhang Shujing Wang Shijin Jiang 《Virologica Sinica》 CAS CSCD 2012年第4期248-253,共6页
To investigate the relationship of the variation of virulence and the external capsid proteins of the pandemic duck hepatitis A virus type 1(DHAV-1) isolates,the virulence,cross neutralization assays and the complete ... To investigate the relationship of the variation of virulence and the external capsid proteins of the pandemic duck hepatitis A virus type 1(DHAV-1) isolates,the virulence,cross neutralization assays and the complete sequence of the virion protein 1(VP1) gene of nine virulent DHAV-1 strains,which were isolated from infected ducklings with clinical symptoms in Shandong province of China in 2007-2008,were tested.The fifth generation duck embryo allantoic liquids of the 9 isolates were tested on 12-day-old duck embryos and on 7-day-old ducklings for the median embryonal lethal doses(ELD 50 s) and the median lethal doses(LD 50 s),respectively.The results showed that the ELD 50 s of embryonic duck eggs of the 9 DHAV-1 isolates were between 1.9 × 10 6 /mL to 1.44 × 10 7 /mL,while the LD 50 s were 2.39 × 10 5 /mL to 6.15 × 10 6 /mL.Cross-neutralization tests revealed that the 9 DHAV-1 isolates were completely neutralized by the standard serum and the hyperimmune sera against the 9 DHAV-1 isolates,respectively.Compared with other virulent,moderate virulent,attenuated vaccine and mild strains,the VP1 genes of the 9 strains shared 89.8%-99.7% similarity at the nucleotide level and 92.4%-99.6% at amino acid level with other DHAV-1 strains.There were three hypervariable regions at the C-terminus(aa 158-160,180-193 and 205-219) and other variable points in VP1 protein,but which didn't cause virulence of DHAV-1 change. 展开更多
关键词 Duck hepatitis A virus type 1 (DHAV-1 Embryonal lethal dose (ELDs0) Lethal dose (LDso) Cross-neutralization tests Virionprotein 1 vp 1
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5株猪O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆与序列分析 被引量:13
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作者 马静云 曹永长 毕英佐 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期70-73,共4页
提取5株猪O型口蹄疫病毒(FMDV)(L1~L5)的RNA,用1对通用引物经RT PCR法扩增了5株病毒VP1基因的DNA片段.克隆后通过测序获得其核苷酸序列,分析表明,除L2株外,其余4株(L1、L3、L4和L5)VP1基因的核苷酸序列同源性在96 7%~99 8%,氨基酸序... 提取5株猪O型口蹄疫病毒(FMDV)(L1~L5)的RNA,用1对通用引物经RT PCR法扩增了5株病毒VP1基因的DNA片段.克隆后通过测序获得其核苷酸序列,分析表明,除L2株外,其余4株(L1、L3、L4和L5)VP1基因的核苷酸序列同源性在96 7%~99 8%,氨基酸序列同源性在99 5%~100%;而L2株与L1、L3、L4和L5株VP1基因的核苷酸序列同源性在82 0%~83 4%,氨基酸序列同源性在89 7%~90 1%.L1、L3、L4和L5株病毒VP1基因的核苷酸序列与已经发表的GD/CHA/86、HKN/1/99、HKN/16/96的同源性较高,核苷酸序列同源性在85 0%~99 8%,属于同一基因型;而与L2、F29/CHINA及国外大多数毒株相比,属于不同的基因型,其核苷酸序列同源性仅为41 0%~82 6%.5株毒株中的L1、L3、L4和L5的主要中和抗原位点140~160、200~213位氨基酸序列完全相同,推测其有相近的中和单抗表位和相同的抗原性. 展开更多
关键词 O型口蹄疫 结构蛋白 口蹄疫病毒 vp1基因 序列分析 基因克隆
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