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乳腺生物反应器表达载体的检测方法 被引量：30
1
作者 徐曼妮 厉曙光 +1 位作者 赵建阳 成国祥 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第5期23-26,共4页
乳腺生物反应器研究和开发的周期长 ,成本大 ,风险高 ,在生产转基因动物之前有必要对乳腺特异性表达载体构建的合理性和有效性进行检测。综述了国内外载体检测研究的进展 ,以及这些检测方法在转基因小鼠。
关键词 乳腺生物反应器 表达载体 检测 转基因动物 细胞培养
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乳腺生物反应器的研究现状 被引量：24
2
作者 薛京伦 卢大儒 《生物技术通报》 CAS CSCD 1998年第3期17-20,16,共5页
乳腺生物反应器是将外源基因在哺乳动物的乳腺中特异表达，以转基因动物的乳腺组织生产药用蛋白。采用乳腺生物反应器生产药用蛋白质是一种全新的生产模式，它已经成为生物技术领域发展的重要方向。乳腺生物反应器具有能够生产出具有完... 乳腺生物反应器是将外源基因在哺乳动物的乳腺中特异表达，以转基因动物的乳腺组织生产药用蛋白。采用乳腺生物反应器生产药用蛋白质是一种全新的生产模式，它已经成为生物技术领域发展的重要方向。乳腺生物反应器具有能够生产出具有完全生物活性的药用蛋白，纯化简单，投资少，成本低，对环境没有任何污染等优点，转基因动物生产药用蛋白可以获得巨额经济效益。荷兰Ｐｈｒａｍｉｎｇ公司制备了含有人乳铁蛋白和促红细胞生成素的转基因牛，英国爱丁堡ＰＰＬ制药公司已培育成功α１－抗胰蛋白酶转基因羊，美国ＧＴＣ开发出凝血酶原ＩＩ转基因羊。我国扬州农学院与中科院发育所合作也成功制备了具有商业价值的ＥＰＯ转基因羊。目前，乳腺生物反应器还不够完善，随机整合，表达水平不一，制备周期长，乳腺特异性表达调控和快速检测系统还需要进一步研究。 展开更多
关键词 转基因动物 乳腺生物反应器 乳腺特异表达
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牛BLG基因5'调控成分的克隆和制备乳腺生物反应器研究 被引量：26
3
作者 杨国庆 戴蕴平 +2 位作者 朱宝利 陈永福 齐顺章 《中国科学（C辑）》 CSCD 1996年第5期463-469,共7页
用PCR法克隆了牛β-乳球蛋白(BLG)基因的 1个片段,它包括 650 bp的 5’侧翼序列,第一二外显子和第一内含子.以该片段中的 650 bP的侧翼序列及转录起始位点下游 11 bP的非编码区(共 661 bP)作为调控序列,与人生长激素(hGH)基因构建成了... 用PCR法克隆了牛β-乳球蛋白(BLG)基因的 1个片段,它包括 650 bp的 5’侧翼序列,第一二外显子和第一内含子.以该片段中的 650 bP的侧翼序列及转录起始位点下游 11 bP的非编码区(共 661 bP)作为调控序列,与人生长激素(hGH)基因构建成了表达载体,在培养的原代山羊乳腺上皮细胞中进行暂时表达,结果在激素诱导下, hGH基因能够表达,并且表达产物的绝大部分分泌到培养基中.将上述表达载体中的BLG/hGH融合基因部分经显微注射法制得5只转基因阳性小鼠,其中1只小鼠乳清中hGH的含量为420 μg/mL而血清中仅为0.051μg/mL,说明本实验克隆的牛BLG基因5’调控序列可以控制目的基因在转基因动物中表达,基本上具有乳腺特异性,而且产物能分泌至乳汁中. 展开更多
关键词 牛BLG基因 调控序列 乳腺生物反应器 生物制品
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动物乳腺生物反应器的现状和趋势 被引量：17
4
作者 苟克勉 安晓荣 +1 位作者 田见晖 陈永福 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期144-148,共5页
利用转基因家畜的乳腺生产人类重组蛋白 ,可以高效获得安全、足量的药用蛋白。本文针对乳腺生物反应器的成功研制 ,从目的基因的选择、载体构建、转基因技术等方面探讨了动物乳腺生物反应器的研究现状。分析了提高转基因效率和外源蛋白... 利用转基因家畜的乳腺生产人类重组蛋白 ,可以高效获得安全、足量的药用蛋白。本文针对乳腺生物反应器的成功研制 ,从目的基因的选择、载体构建、转基因技术等方面探讨了动物乳腺生物反应器的研究现状。分析了提高转基因效率和外源蛋白表达水平的技术途径 ,提出了降低总体成本的战略措施。特别探讨了利用Cre loxP系统发展“体细胞打靶 体细胞核移植技术体系” 。 展开更多
关键词 转基因动物 乳腺生物反应器 核移植 发展趋势
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转基因动物与生物医药产业 被引量：23
5
作者 曾溢滔 《生物学通报》 北大核心 1999年第4期1-3,共3页
利用转基因动物——乳腺生物反应器生产药物蛋白，好比在动物身上建“药厂”，可以从动物乳汁中源源不断地获得具有稳定生物活性的基因产品。这是一种全新的药物生产模式，具有投资成本低，药物研制周期短和经济效益高等优点。
关键词 转基因动物 乳腺生物反应器 基因药物
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转人血清白蛋白基因试管牛的研究 被引量：11
6
作者 黄淑帧 黄英 +6 位作者 陈美珏 陈巍 黄赞 李华 李景春 任兆瑞 曾溢滔 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第7期573-579,共7页
构建了含人血清白蛋白（hALB）基因的cDNA全序列、内含子1以及山羊β－酪蛋白基因启动子和5’端上游调控序列在内的乳腺表达载体pcDNA3.1－GCALBm，并通过显微注射将其导入经过体外受精（IVF）的奶牛受精卵中，体外培养到桑椹胚后期，... 构建了含人血清白蛋白（hALB）基因的cDNA全序列、内含子1以及山羊β－酪蛋白基因启动子和5’端上游调控序列在内的乳腺表达载体pcDNA3.1－GCALBm，并通过显微注射将其导入经过体外受精（IVF）的奶牛受精卵中，体外培养到桑椹胚后期，取出少许细胞，应用巢式PCR对其进行目的基因整合及性别的预鉴定，将10枚整合胚移植于8头受体母牛，结果有3头妊娠，受孕率为37.5％（3／8），其中2头于妊娠中期流产，另有1头足月分娩产下1头有人血清白蛋白基因整合的雄性转基因试管牛，转基因实验的总有效率为12.5％（1／8）。 展开更多
关键词 体外受精 转基因牛 乳腺生物反应器 hALB
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山羊乳腺上皮细胞培养体系的建立 被引量：12
7
作者 欧阳五庆 钱菊汾 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第3期30-34,共5页
为研究乳腺上皮细胞增殖和分化特性及其基因表达的分子机制 ,建立了山羊乳腺上皮细胞培养体系。用无菌手术法从健康第二胎泌乳期山羊乳腺取得组织块 ,在体外条件下用组织块法进行原代培养。基础培养液用 RPMI1 6 4 0 ,含胎牛血清 1 5 0 ... 为研究乳腺上皮细胞增殖和分化特性及其基因表达的分子机制 ,建立了山羊乳腺上皮细胞培养体系。用无菌手术法从健康第二胎泌乳期山羊乳腺取得组织块 ,在体外条件下用组织块法进行原代培养。基础培养液用 RPMI1 6 4 0 ,含胎牛血清 1 5 0 m L/ L,添加 EGF(1 0 μg/ L)、胰岛素 (0 .1 m g/ L)、E2 (1 μg/ L)、氢化可的松 (0 .1mg/ L)、孕酮 (1 m g/ L)、青霉素 (0 .1 g/ L)及链霉素 (0 .0 5 g/ L) ,在铺有胶原的塑料培养板上培养。从细胞接种存活率、细胞群体倍增时间、细胞生长曲线和细胞分裂指数 4个方面考察了乳腺上皮细胞的生物学性状。结果表明 ,在此培养体系中 ,山羊乳腺上皮细胞生长良好 ,增殖旺盛。细胞产物电泳及蛋白印迹分析结果表明 ,培养的细胞为山羊乳腺上皮细胞 。 展开更多
关键词 山羊 乳腺上皮细胞 培养体系 细胞增殖 细胞分化 基因表达 分子机制 乳腺生物反应器 酪蛋白
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乳腺生物反应器实用化研究—现状与问题 被引量：20
8
作者 劳为德 张旭晨 《生物工程进展》 CSCD 1996年第4期38-46,共9页
转基因家畜的乳腺有可能作为生物反应器来生产具有生物活性的多肽药物和具特殊营养意义的蛋白质。一个新兴的转基因动物制药业已开始崛起。用乳汁蛋白质基因的调节元件不仅有可能使转基因的表达只限于乳腺组织，而且有可能使转基因表达... 转基因家畜的乳腺有可能作为生物反应器来生产具有生物活性的多肽药物和具特殊营养意义的蛋白质。一个新兴的转基因动物制药业已开始崛起。用乳汁蛋白质基因的调节元件不仅有可能使转基因的表达只限于乳腺组织，而且有可能使转基因表达产物得到高水平表达和大量生产。各种酪蛋白，以及乳清蛋白和乳球蛋白等基因的调节元件已相继被克隆和投入使用。已经有多种具有生物活性的昂贵的医用蛋白质在乳腺组织中合成并分泌。迄今，转基因动物的研究明确了在乳蛋白基因启动区域上游区的一些乳腺特异和激素诱导转录元件，细胞系和原代培养细胞的转染的研究鉴别了一些组成性和激素诱导的因子。但转基因随机整合造成的“位置效应”所引起表达结果的不确定性，限制了乳腺生物反应器产业化的形成和发展。由于乳汁蛋白质基因的表达都具有典型的时空特异性格式，乳蛋白基因的表达受到了激素和发育调节的转录因子的综合调控。为使乳腺反应器的应用更卓有成效和得心应手，我们尚需对它的发育和激素调控密切相关的生理学和染色体座位具备充分了解。 展开更多
关键词 乳腺生物反应器 转基因家畜 农业生物工程
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转基因动物乳腺生物反应器与基因工程药物 被引量：14
9
作者 杨帆 吴文彦 杨红 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2002年第1期14-19,共6页
利用转基因动物-乳腺生物反应器生产药物蛋白,好比在动物身上建“药厂”,可以从动物乳汁中源源不断地获得具有稳定生物活性的基因产品。这是一种全新的药物生产模式,具有投资成本低,药物研制周期短和经济效益高等优点。它已经成为生物... 利用转基因动物-乳腺生物反应器生产药物蛋白,好比在动物身上建“药厂”,可以从动物乳汁中源源不断地获得具有稳定生物活性的基因产品。这是一种全新的药物生产模式,具有投资成本低,药物研制周期短和经济效益高等优点。它已经成为生物技术领域发展的重要方向。本文系统地分析了利用转基因动物乳腺生物反应器生产基因工程药物的优越性、基本生产方法、存在的问题和原因及产业化进展。 展开更多
关键词 转基因动物 乳腺生物反应器 基因工程药物 药用蛋白
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乳腺生物反应器的研究现状和产业化前景 被引量：14
10
作者 王庆忠 李国荣 +2 位作者 尹昆 张会亮 李云龙 《生命科学》 CSCD 2005年第1期76-81,共6页
转基因动物乳腺生物反应器是伴随转基因动物技术而发展起来的一项高新生物技术。利用这项技术,我们可以从动物乳汁中源源不断地获取用于医疗或保健目的的有生物活性的基因产物。这是一种全新的蛋白质生产模式,它将成为许多国家的重要支... 转基因动物乳腺生物反应器是伴随转基因动物技术而发展起来的一项高新生物技术。利用这项技术,我们可以从动物乳汁中源源不断地获取用于医疗或保健目的的有生物活性的基因产物。这是一种全新的蛋白质生产模式,它将成为许多国家的重要支柱产业之一。本文介绍了乳腺生物反应器的基本概念和基本原理;概述了制备过程中的目的基因选择、载体构建、转基因等技术环节的研究现状;分析了乳腺生物反应器的优势及存在的问题,并就其产业化前景进行了展望。 展开更多
关键词 转基因动物 乳腺生物反应器 表达载体 转基因技术
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乳腺生物反应器制备中表达载体的发展 被引量：8
11
作者 陈红星 杨晓 黄培堂 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期136-139,共4页
乳腺生物反应器拥有巨大的开发价值 ,但开发成功的例子却寥寥可数 ,主要的原因是外源基因的表达量较低 ,达不到开发生产的要求。提高外源基因表达量的关键在于乳腺生物反应器表达载体的构建。近年来 ,这方面的新思路、新方法不断出现 。
关键词 乳腺生物反应器 表达载体 转基因动物
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体细胞基因打靶制备动物乳腺生物反应器的策略与应用 被引量：13
12
作者 沈伟 2.杨正田 邓继先 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期767-770,共4页
在转基因动物研究中 ,由于基因表达调控元件的人工拼接和外源基因在动物基因组中随机整合所带来的“位置效应” ,致使转基因动物外源基因的表达水平不高并且差异较大。为此 ,利用定位整合优势 ,对以基因同源重组为基础的基因打靶技术进... 在转基因动物研究中 ,由于基因表达调控元件的人工拼接和外源基因在动物基因组中随机整合所带来的“位置效应” ,致使转基因动物外源基因的表达水平不高并且差异较大。为此 ,利用定位整合优势 ,对以基因同源重组为基础的基因打靶技术进行了大量研究。介绍了就利用体细胞基因打靶和核移植技术制备动物乳腺生物反应器的策略和应用情况做一综述 ,并对提高基因打靶效率的各种策略 ,打靶细胞的选择 ,转基因细胞核移植的低融合事件以及基因打靶制备乳腺生物反应器的优越性进行分析。 展开更多
关键词 基因打靶 核移植 转基因动物 乳腺生物反应器
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乳腺免疫研究进展 被引量：8
13
作者 巢国正 陈耀星 +2 位作者 邱春红 白永平 邓泽沛 《中国畜牧兽医》 CAS 2003年第1期34-36,共3页
乳腺生物反应器是现今生物学领域备受关注的焦点。探索和研究乳腺免疫调节机制将有助于加快乳腺生物反应器产业化进程。作者综述了乳腺免疫特点。
关键词 乳腺生物反应器 乳腺免疫 非特异性免疫 特别性免疫 功能细胞 效应分子
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哺乳动物乳腺生物反应器的研究现状及存在问题 被引量：10
14
作者 孙国杰 桑润滋 +1 位作者 李俊杰 韩建永 《黄牛杂志》 2002年第3期28-31,共4页
本文在阐述乳腺生物反应器概念的基础上,介绍了乳腺生物反应器的原理及应用现状,指出乳腺生物反应器将在生产新型牛奶和药用珍稀蛋白等方面为人类做出巨大的贡献,最后指出存在的问题并展望了乳腺生物反应器前景。
关键词 哺乳动物 乳腺生物反应器 研究现状 存在问题
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乳腺生物反应器的研究和产业化进展 被引量：11
15
作者 付玉华 周秀梅 钱其军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第8期45-51,共7页
随着转基因技术的发展,利用乳腺生物反应器生产珍贵药用蛋白已成为一种极具潜力的生物技术,它为商业化前景广阔的药用蛋白提供了高产量、低成本的生产方式,开创了基因工程制药的新途径。目前,应用乳腺生物反应器已表达百余种药用蛋白,... 随着转基因技术的发展,利用乳腺生物反应器生产珍贵药用蛋白已成为一种极具潜力的生物技术,它为商业化前景广阔的药用蛋白提供了高产量、低成本的生产方式,开创了基因工程制药的新途径。目前,应用乳腺生物反应器已表达百余种药用蛋白,其中近30种进入临床试验不同阶段,用于治疗抗凝血酶缺乏症的抗凝血酶Ⅲ(ATryn)已上市,乳腺生物反应器生产重组蛋白显示出广阔的产业化前景。作者概述了乳腺生物反应器的原理、优点、国内外研究进展和产业化进程,讨论了其目前存在问题和应对策略。 展开更多
关键词 转基因动物 乳腺生物反应器 重组蛋白 多潜能干细胞
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转基因猪的研究现状及应用前景 被引量：9
16
作者 崔文涛 单同领 李奎 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第4期58-62,共5页
猪作为重要的经济动物是人类生活关系最为密切的家畜之一。又因妊娠期短、繁殖力强、后代生长快等特点使其成为常用的试验研究动物。猪在解剖、组织、生理和营养代谢等方面亦与人类接近,因此,转基因猪的研究获得了众多科学家及投资家的... 猪作为重要的经济动物是人类生活关系最为密切的家畜之一。又因妊娠期短、繁殖力强、后代生长快等特点使其成为常用的试验研究动物。猪在解剖、组织、生理和营养代谢等方面亦与人类接近,因此,转基因猪的研究获得了众多科学家及投资家的青睐,成功实例也证明了其在生命科学研究中具有独特的优越性和实用价值。作者主要从转基因猪的制作方法与应用两方面作一综述。 展开更多
关键词 猪 转基因 转基因育种 乳腺生物反应器
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人凝血Ⅸ因子乳腺生物反应器的研制 被引量：8
17
作者 邱信芳 张克忠 +1 位作者 卢大儒 薛京伦 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期365-371,共7页
为了建立人凝血Ⅸ因子乳腺生物反应器，以MCK增强子，β－actin启动于控制hFIX小基因（minigene）表达顺序，反向插入G1Na框架，构建复制缺陷反转录病毒载体，并制备重组反转录病毒颗粒；以CMV启动子，hFIXcDNA和腺病毒框架构建腺病毒载... 为了建立人凝血Ⅸ因子乳腺生物反应器，以MCK增强子，β－actin启动于控制hFIX小基因（minigene）表达顺序，反向插入G1Na框架，构建复制缺陷反转录病毒载体，并制备重组反转录病毒颗粒；以CMV启动子，hFIXcDNA和腺病毒框架构建腺病毒载体pAdCMVhFIX，与质粒pJM17共转染包装细胞制备合hFIX基因的重组腺病毒颗粒．两种病毒颗粒分别通过直接转染活体奶山羊乳腺组织，建立了hFIX蛋白的乳腺表达系统和快速检测系统．另外，利用小鼠MAR（matrixattachmentregion）元件，牛β－Casein基因，人凝血Ⅸ因子小基因和cDNA构建了乳腺组织特异性表达载体．以Stearylamine（SA）阳离子脂质体介导、尾静脉注射的方法转染哺乳期雌性小鼠的活体组织，建立Ⅸ因子表达的快速检测系统，并研究了β－casein基因，hFIX基因intron1对hFIX基因在乳腺组织中表达调控的作用．在此基础上将筛选得到的pMCIXm表达载体通过显微注射技术注人小鼠和奶山羊受精卵细胞，制备6只转基因小鼠和5只转基因奶山羊．其中在2只转基因小鼠和1头奶山羊乳汁中测得hFIX蛋白的表达并具有凝血活性． 展开更多
关键词 人凝血因子Ⅸ 乳腺生物反应器 转基因动物
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转基因小鼠乳腺表达重组人溶菌酶 被引量：9
18
作者 于政权 樊宝良 +6 位作者 戴蕴平 郑敏 牛慧玲 王美丽 王丽丽 费菁 李宁 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第20期2149-2153,共5页
人溶菌酶是由130个氨基酸组成的碱性多肽,具有抗菌、抗病毒和增强免疫力的功能,对生物体的自身防御起着重要作用.为研究乳腺生物反应器表达重组人溶菌酶和提高牛奶的免疫活性,制备了以溶菌酶基因组序列为目标基因的表达载体的转基因小... 人溶菌酶是由130个氨基酸组成的碱性多肽,具有抗菌、抗病毒和增强免疫力的功能,对生物体的自身防御起着重要作用.为研究乳腺生物反应器表达重组人溶菌酶和提高牛奶的免疫活性,制备了以溶菌酶基因组序列为目标基因的表达载体的转基因小鼠模型.经转基因小鼠的制备,通过PCR和Southern blot检测,从83只出生小鼠中获得6只整合人溶菌酶融合基因的转基因小鼠.对F1代小鼠的PCR检测表明外源基因可以遗传给后代.在3只转基因阳性母鼠的乳汁中,用Western blot方法可以检测到重组人溶菌酶的存在,最高表达量达到0.2 mg/mL.经活性检测,转基因小鼠乳清的溶菌酶活性显著提高,已达到人乳清溶菌酶活性的0.4倍,而非转基因小鼠乳清具有极低的溶菌酶活性.尽管转基因小鼠乳清中重组人溶菌酶活性还低于人乳清中溶菌酶活性,但是转基因小鼠乳汁中的重组人溶菌酶与人溶菌酶具有相同的比活力.为乳腺生物反应器表达重组人溶菌酶的研究和开发应用打下了坚实的基础. 展开更多
关键词 转基因 小鼠 溶菌酶 溶菌作用 乳腺生物反应器 PCR Southernblot检测 牛奶
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乳腺生物反应器的基础研究──载体构建,检测及反应器的建立方法 被引量：5
19
作者 张克忠 邱信芳 《国外医学（遗传学分册）》 1997年第6期314-318,共5页
乳腺生物反应器的研究和开发是近年生物工程领域的研究热点。乳腺特异性表达调控的研究和表达载体的构建是该工作的基础和关键。本文介绍了乳腺蛋白基因表达调控的研究现状，外源基因乳腺特异性表达载体构建策略以及乳腺生物反应器建立... 乳腺生物反应器的研究和开发是近年生物工程领域的研究热点。乳腺特异性表达调控的研究和表达载体的构建是该工作的基础和关键。本文介绍了乳腺蛋白基因表达调控的研究现状，外源基因乳腺特异性表达载体构建策略以及乳腺生物反应器建立方法的研究进展。 展开更多
关键词 乳腺生物反应器 载体构建 检测 生物工程
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转基因动物乳腺生物反应器研究进展 被引量：8
20
作者 朱小甫 渠敬峰 +3 位作者 吴旭锦 樊松涛 马秋明 高睿 《畜牧兽医杂志》 2007年第3期50-52,共3页
文章综述了转基因动物乳腺生物反应器的原理、应用、优点、存在问题及国内外研究进展,并对其发展方向进行了小结及展望。
关键词 转基因动物 乳腺生物反应器 应用
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