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犬伪狂犬病的临床诊断及防制 被引量：2
1
作者 李强 毕可东 +2 位作者 臧玉鹏 祁业杰 徐玉 《畜牧与兽医》 北大核心 2016年第3期155-155,共1页
伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的多种动物共患的传染病,犬是除兔外对该病毒最为敏感的动物。本病潜伏期3～6 d,一旦发病,多在48 h之内死亡,特征性临床症状为突然瘙痒,剧烈地抓挠或啃咬某一部位,以头颈部多见,犬一旦感染发病,几乎无一幸免。
关键词 犬伪狂犬病 猪伪狂犬病 临床诊断 临床症状 苏格兰牧羊犬 狂犬病毒感染 宠物主人 狂犬疫苗 火碱溶液 阿拉斯加雪橇犬
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猫杯状病毒分子生物学特征及研究进展 被引量：8
2
作者 谢守玉 张健騑 +2 位作者 吴健敏 白安斌 向华 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第6期79-83,共5页
猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是在猫科动物中高度流行的重要病原体,能够引起猫科动物急性口腔溃疡、上呼吸道传染病和慢性胃肠炎等疾病。目前研究证明疫苗免疫可有效减少该病的发生。此外,已开展FCV反向遗传操作系统的研究,并成... 猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是在猫科动物中高度流行的重要病原体,能够引起猫科动物急性口腔溃疡、上呼吸道传染病和慢性胃肠炎等疾病。目前研究证明疫苗免疫可有效减少该病的发生。此外,已开展FCV反向遗传操作系统的研究,并成功表达外源基因,为进一步研究特定蛋白的结构和功能、病毒致病机理、构建杯状病毒嵌合载体疫苗打下了基础。本文从FCV的病原及生物学特性、基因组结构及其编码产物、致病机理、流行病学及疫病的防治等方面进行综合阐述。 展开更多
关键词 杯状病毒 猫杯状病毒 基因组结构 致病机理
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禽腺病毒载体研究进展 被引量：4
3
作者 赵莉 周洁 高诚 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第11期99-103,共5页
人腺病毒载体被广泛地用作转基因工具。然而,人体内预先存在的针对人腺病毒的抗体影响了转基因的效率,阻碍了这些载体在临床上的应用。避免宿主免疫反应的途径之一是开发能将基因转导至人细胞的动物腺病毒载体,而禽腺病毒载体是目前动... 人腺病毒载体被广泛地用作转基因工具。然而,人体内预先存在的针对人腺病毒的抗体影响了转基因的效率,阻碍了这些载体在临床上的应用。避免宿主免疫反应的途径之一是开发能将基因转导至人细胞的动物腺病毒载体,而禽腺病毒载体是目前动物腺病毒载体研究中较多的一种。禽腺病毒载体还可插入并表达病原的保护性抗原基因,用于疫苗研制。对禽腺病毒的分子生物学和载体疫苗的深入研究,将对禽类疫病预防起到重要作用。论文详细叙述了禽腺病毒的基因组结构特点以及禽腺病毒载体的研究现状,为研究者提供参考。 展开更多
关键词 人腺病毒 禽腺病毒 鸡胚致死孤儿病毒 载体
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广西某集约化猪场猪伪狂犬病的监测及净化 被引量：3
4
作者 蒋建国 张显浩 +1 位作者 李冰 贺东生 《广东畜牧兽医科技》 2014年第4期15-17,共3页
为了解某集约化猪场伪狂犬病病毒(PRV)的感染情况,清除感染猪只,净化伪狂犬病,提高猪群的健康水平。采用PRV gE抗体ELISA检测试剂盒,对该场免疫了猪伪狂犬病基因缺失疫苗的猪群进行3次野毒感染检测;应用荧光PCR方法,对临床发病的仔猪进... 为了解某集约化猪场伪狂犬病病毒(PRV)的感染情况,清除感染猪只,净化伪狂犬病,提高猪群的健康水平。采用PRV gE抗体ELISA检测试剂盒,对该场免疫了猪伪狂犬病基因缺失疫苗的猪群进行3次野毒感染检测;应用荧光PCR方法,对临床发病的仔猪进行PRV病原检测。经过动态监测、加强综合防控和逐步淘汰措施,该猪场的PRV野毒感染率从35.29%逐步降低至0%,猪场自繁的仔猪存活率高,无PRV感染,净化效果良好。 展开更多
关键词 伪狂犬病野毒 感染 检测 净化
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伪狂犬病毒变异株(JS-2012)对仔猪的致病性研究 被引量：37
5
作者 童武 郑浩 +8 位作者 单同领 刘飞 梁超 李国新 姜一峰 于海 高飞 周艳君 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第5期10-14,共5页
本实验室2012年从江苏省太仓市某发病猪场分离到1株变异的伪狂犬病毒,命名为JS-2012。为了研究该分离株对仔猪的致病性,将12头15日龄的伪狂犬病毒阴性仔猪随机分为3组,其中2组(每组5头猪)分别通过肌肉注射和滴鼻接种JS-2012毒,第3组2头... 本实验室2012年从江苏省太仓市某发病猪场分离到1株变异的伪狂犬病毒,命名为JS-2012。为了研究该分离株对仔猪的致病性,将12头15日龄的伪狂犬病毒阴性仔猪随机分为3组,其中2组(每组5头猪)分别通过肌肉注射和滴鼻接种JS-2012毒,第3组2头猪做空白对照。接种病毒的仔猪在攻毒后24 h体温均开始升高,4 d后开始死亡,死亡率为100%。临床观察发现,滴鼻组仔猪发病死亡明显快于肌肉注射组。对病死猪进行剖解,均可见大脑血管扩张并出血等典型的伪狂犬病病理变化。病理切片显示猪的脑蛛网膜下腔严重出血,其他各脏器也均有严重病理变化。结果表明该变异株JS-2012为伪狂犬强毒毒株。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 JS-2012 仔猪 致病性
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一株携带EGFP基因的重组伪狂犬病毒变异株的构建 被引量：2
6
作者 童武 郑浩 +8 位作者 梁超 刘飞 曹艳云 李林 田青 郑旭晨 单同领 李国新 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第4期1-7,共7页
本研究运用同源重组的方法,在伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株PRV JS-2012基础上,构建了一株携带增强型绿色荧光蛋白基因的标记重组伪狂犬病毒,命名为r PRV JS-2012-EGFP。经PCR方法鉴定及荧光显微镜观察分析,结果表明重组病... 本研究运用同源重组的方法,在伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株PRV JS-2012基础上,构建了一株携带增强型绿色荧光蛋白基因的标记重组伪狂犬病毒,命名为r PRV JS-2012-EGFP。经PCR方法鉴定及荧光显微镜观察分析,结果表明重组病毒构建成功,并能在感染细胞中稳定表达绿色荧光蛋白。生长曲线和空斑试验结果显示,r PRV JS-2012-EGFP与亲本株PRV JS-2012在体外具有相似的生长特性。将r PRV JS-2012-EGFP毒接种14日龄PRV阴性仔猪,能使实验猪100%发病,病死率高达40%,表明r PRV JS-2012-EGFP是一株具有强致病力的标记伪狂犬病毒变异株,在伪狂犬病毒变异株致病机制研究中具有一定的使用价值。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 同源重组 重组病毒 绿色荧光蛋白
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猪伪狂犬基因缺失疫苗的的研究进展 被引量：13
7
作者 薛爽 《湖南畜牧兽医》 2016年第4期47-49,共3页
猪伪狂犬病(Pseudorabies)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的多种家畜以发热、奇痒(猪除外)、繁殖障碍、脑脊髓炎为主要症状的一种高度接触性传染病,给养殖业带来很大的危害。而对该病最有效的预防措施是采取疫苗免疫,疫... 猪伪狂犬病(Pseudorabies)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的多种家畜以发热、奇痒(猪除外)、繁殖障碍、脑脊髓炎为主要症状的一种高度接触性传染病,给养殖业带来很大的危害。而对该病最有效的预防措施是采取疫苗免疫,疫苗免疫是预防该病的主要手段,临床上使用的疫苗又以猪伪狂犬基因缺失疫苗为主。文章就目前猪伪狂犬基因缺失疫苗的研究现状及主要的商品化基因缺失疫苗做一简要综述。 展开更多
关键词 猪伪狂犬 基因缺失疫苗 商品化疫苗
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表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性及生物安全性评价 被引量：4
8
作者 卢军 胡传伟 +5 位作者 金乔 彭大新 刘文博 高崧 张如宽 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期327-331,共5页
为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-g... 为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-gB/R中的gB基因始终能稳定表达;序列测定结果表明,重组病毒在细胞上连续传30代、在SPF鸡上连续传5代后,gB基因序列没有发生任何变化;以0、10、20、30代重组病毒制成冻干疫苗进行的实验室免疫效力实验表明,细胞连续传代后rFPV-gB/R仍然保持了原有的免疫原性。可见重组鸡痘病毒gB基因的结构和免疫原性都是高度稳定的。为了评价rFPV-gB/R的生物安全性,我们将rFPV-gB/R通过SPF鸡连续传5代,检测病毒在鸡体的存在部位及其消长、生长繁殖性能和毒力变化;将rFPV-gB/R免疫鸡与未免疫鸡同笼饲养,攻击FPV-102E6强毒,以检测rFPV-gB/R感染鸡的接触传染性。结果显示,rFPV-gB/R在鸡体的存在时间大约为7d,在体内仅存在于接种部位;鸡体传代后痘病毒毒力有一定程度下降,gB基因核苷酸序列未发生任何变化;同居未免疫SPF鸡在痘病毒强毒攻击后全部发痘,可见重组病毒免疫鸡没有接触传染性,能在鸡体内稳定地传代,rFPV-gB/R具有高度的生物安全性。 展开更多
关键词 鸡马立克氏病 重组鸡痘病毒 GB基因 遗传稳定性 生物安全性
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羊痘研究概况 被引量：25
9
作者 蔺润霞 《动物医学进展》 CSCD 2007年第9期95-98,共4页
羊痘病毒基因组庞大,约有150 kb,包括中间编码区和两端相同的反向末端重复序列;绵羊痘病毒和山羊痘病毒基因组彼此十分相似,约有96%的核苷酸完全相同。p32蛋白是目前世界各地分离鉴定的所有羊痘病毒株共有的且特异性很强的结构蛋白,在... 羊痘病毒基因组庞大,约有150 kb,包括中间编码区和两端相同的反向末端重复序列;绵羊痘病毒和山羊痘病毒基因组彼此十分相似,约有96%的核苷酸完全相同。p32蛋白是目前世界各地分离鉴定的所有羊痘病毒株共有的且特异性很强的结构蛋白,在诊断和预防方面具有重要的应用价值。虽然羊痘从临床症状和宿主特异性上很容易做出诊断,但进一步的实验室确诊还是必要的,现已有多种检测方法和诊断试剂。控制该病最有效的方法是使用疫苗对易感动物进行免疫接种。文章从病原学、诊断和预防控制等方面对羊痘进行综述。 展开更多
关键词 羊痘病毒 p32蛋白 诊断 疫苗
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非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位 被引量：10
10
作者 侯景 申超超 +10 位作者 张大俊 杨博 史喜绢 张婷 崔卉梅 袁兴国 赵登率 陈学辉 张克山 郑海学 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1953-1962,共10页
旨在通过预测分析和亚细胞定位研究非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L基因结构、亚细胞定位与功能间的关系。作者使用Mega6.0软件绘制了7株不同基因型的D1133L解旋酶和ASFV编码的其他5个解旋酶基因的系统进化树,使用EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL... 旨在通过预测分析和亚细胞定位研究非洲猪瘟病毒(ASFV)D1133L基因结构、亚细胞定位与功能间的关系。作者使用Mega6.0软件绘制了7株不同基因型的D1133L解旋酶和ASFV编码的其他5个解旋酶基因的系统进化树,使用EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL软件预测了该基因所编码蛋白序列的二、三级结构;根据GenBank公布的ASFV序列(LR743116.1),合成D1133L基因并构建其重组真核表达质粒pCMV-D1133L,蛋白免疫印迹(Western blot,WB)验证该基因表达后,将重组质粒转染至PK-15细胞,应用间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)研究了该蛋白的亚细胞定位。结果表明,通过ASFV解旋酶的基因系统进化树,发现5种解旋酶基因均相对保守。D1133L基因全长3402 bp,表达的蛋白为124.63 ku,G+C含量为6.1%,A+T含量为10.6%;二级结构分析表明α螺旋占48.90%,扩展链占13.50%,无规卷曲为33.27%;三级结构分析表明六自由度结构(six degree of freedom,QMQE)为0.20,覆盖率84%,且预测以α螺旋为主的高级结构;通过LOCSVMPSI分析预测,显示D1133L蛋白定位于细胞核内与细胞质内的概率是相同的。WB结果显示pCMV-D1133L质粒正常表达,IFA试验证明ASFV编码的解旋酶D1133L同时分布于细胞核和细胞质。本研究通过对D1133L基因序列、结构功能预测,并通过IFA验证了D1133L亚细胞分布,为进一步揭示D1133L基因功能奠定了一定基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 解旋酶 D1133L基因 序列分析 结构预测 亚细胞定位
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病毒保护剂在鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中的应用
11
作者 朱良全 张万林 +1 位作者 金丽霞 王栋 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期35-38,共4页
2种不同的病毒保护剂A和B,应用于鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中,3批试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,保护剂B的蚀斑数比对照平均增加121%,保护剂A最低使减少14%。保护剂B的最佳添加浓度筛选试验结果表明:1次添加浓度为1%或2%,... 2种不同的病毒保护剂A和B,应用于鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中,3批试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,保护剂B的蚀斑数比对照平均增加121%,保护剂A最低使减少14%。保护剂B的最佳添加浓度筛选试验结果表明:1次添加浓度为1%或2%,2次添加浓度为2%。3批病毒保护剂B扩大中试试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,试验组比对照组蚀斑数平均增加66.5%。HVT活疫苗(病毒保护剂B)特异性试验结果表明,马立克氏病标准阳性血清对其特异性识别;平行冻干后,试验组比对照组蚀斑数高200%;经37℃10d耐热试验表明,试验组比对照组蚀斑数高242%;试验苗免疫攻毒保护率为75%,对照苗为33.4%。 展开更多
关键词 病毒保护剂 鸡马立克氏病欠鸡疱疹病毒 活疫苗
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猪巨细胞病毒PCR检测方法的建立及应用 被引量：2
12
作者 刘红亮 朱玲 +4 位作者 徐志文 王燕群 魏浩澈 郭万柱 赵玲 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第7期5-8,共4页
参考GenBank中收录的猪巨细胞病毒(PCMV)DNA聚合酶基因序列设计合成了一对引物,扩增目的片段为236 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性和重复性试验,建立了PCMV的PCR检测方法。结果表明,该方法对模板的最低检测量为1.1 pg,具有良好的... 参考GenBank中收录的猪巨细胞病毒(PCMV)DNA聚合酶基因序列设计合成了一对引物,扩增目的片段为236 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性和重复性试验,建立了PCMV的PCR检测方法。结果表明,该方法对模板的最低检测量为1.1 pg,具有良好的特异性、敏感性和重复性。应用该法对猪同时感染PCMV和PRRSV相关性进行初步探究,36份PRRSV阳性病料中,PCMV检出率为63.89%。该法可用于PCMV的临床发病诊断和流行病学监测等。 展开更多
关键词 猪巨细胞病毒 DNA聚合酶 PCR
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山东省部分地区猪伪狂犬病病毒分离鉴定及TK基因遗传变异分析 被引量：4
13
作者 古金元 刘照虎 +5 位作者 马梓承 李焱 孟凡亮 王宏宇 肖一红 刘思当 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第5期69-74,共6页
为了解当前山东省猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)流行特点,本研究对2018年来自山东省不同地区的10份伪狂犬疑似病料进行PRV的分离鉴定,并对分离株的TK基因进行了序列测定及遗传变异分析。结果表明,共分离到7株PRV,其TK基因核... 为了解当前山东省猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)流行特点,本研究对2018年来自山东省不同地区的10份伪狂犬疑似病料进行PRV的分离鉴定,并对分离株的TK基因进行了序列测定及遗传变异分析。结果表明,共分离到7株PRV,其TK基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为99.1%~99.8%和98.7%~99.4%,与参考毒株TK基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97.8%~99.9%和97.2%~99.7%,而且7株分离株与国内报道的PRV变异株的核苷酸和氨基酸序列的同源性均高于欧美毒株。对TK基因的核苷酸序列分析发现,与欧美参考株相比,分离株和国内变异株在其碱基第644-645位由AC突变为GT,导致其氨基酸第215位由苏氨酸(T)突变为缬氨酸(V)。TK基因的遗传进化树分析结果表明,本研究中7株分离株分别与国内之前报道的JS-2012、HeN1、TJ以及ZMD2012等变异株位于两个相对独立的分支上,亲缘关系较近,而都与NIA3、Becker等欧美毒株以及疫苗株Kaplan(Bartha-K61株)的遗传距离较远。结果表明,本研究所得7株分离株均应属于PRV变异毒株。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 变异毒株 TK基因 遗传变异分析
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禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定 被引量：6
14
作者 郭瑞珍 苏冰倩 +6 位作者 王棋 王一 于朋伟 孟洁洁 齐艳丽 杨国宇 褚贝贝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期2000-2012,共13页
旨在制备禽腺病毒血清4型(FAdV-4)纤突蛋白(Fiber2)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的可溶性重组蛋白NusA-Fiber2作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得3株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白MAb的杂交瘤细胞株2G5、2G8、4C2,取细胞... 旨在制备禽腺病毒血清4型(FAdV-4)纤突蛋白(Fiber2)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的可溶性重组蛋白NusA-Fiber2作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得3株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白MAb的杂交瘤细胞株2G5、2G8、4C2,取细胞株2G5制备腹水并纯化,利用间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot鉴定该单抗的特异性。用制备的单抗包被酶标板,通过一系列的优化,建立了FAdV-4 Fiber2双抗夹心ELISA检测方法。通过逐步截短分析鉴定出单克隆抗体识别的抗原表位区域。结果表明:成功获取3株单克隆细胞株2G5、2G8、4C2。MAb 2G5可与原核表达纯化的Fiber2蛋白及FAdV-4特异性反应。建立的双抗夹心ELISA检测方法具有很好的特异性、灵敏性和重复性。该MAb识别的表位序列是N端aa1—33。本研究成功制备了具有良好Western blot和IFA反应原性的单克隆抗体,为Fiber2蛋白功能研究和FAdV-4新型表位疫苗商品化研发奠定了基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 Fiber2蛋白 单克隆抗体 双抗夹心ELISA 表位鉴定
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带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究 被引量：16
15
作者 彭金美 王瑜 +4 位作者 田志军 周艳君 陈瑾 安同庆 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期10-15,共6页
本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载... 本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BACII。将PRV基因组和转移载体共转染Vero细胞,利用同源重组在Bartha K61株的TK基因中插入了BAC质粒和绿色荧光蛋白筛选标记,经过11轮噬斑纯化和鉴定证实获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC。通过噬斑试验和一步生长曲线测定等方法对重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC的生长特性进行研究,结果发现带有BAC质粒及筛选标记的重组病毒rv-PRVBAC在体外细胞培养中的增殖速度与亲本毒Bartha K61株相比没有明显差别,说明大的基因片段的插入没有影响重组病毒在体外的繁殖速度。重组病毒rv-PRVBAC在Vero细胞上盲传18代,其绿色荧光蛋白仍能够稳定表达,通过PCR鉴定可以检测到插入的外源片段和插入位点两侧的病毒基因序列,表明所获得的重组病毒rv-PRVBAC得到了稳定遗传。本研究成功获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC,为进一步开展PRV的细菌人工染色体的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 Bartha K61株 BAC 重组病毒
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马疱疹病毒糖蛋白G基因C-末端的原核表达 被引量：3
16
作者 田志革 郭巍 +1 位作者 相文华 曲娟娟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期577-581,共5页
为获得马疱疹病毒1型(EHV1)和4型(EHV4)糖蛋白G(gG),对克隆载体pMD-1gG和pMD-4gG分别进行BamHⅠ+SalⅠ和EcoRⅠ+HindⅢ双酶切,将所得片段分别插入表达载体pGEX-6P-1和pET28a(+)中,构建了重组质粒pGEX-1gG和pET-4gG。经双酶切和序列鉴定... 为获得马疱疹病毒1型(EHV1)和4型(EHV4)糖蛋白G(gG),对克隆载体pMD-1gG和pMD-4gG分别进行BamHⅠ+SalⅠ和EcoRⅠ+HindⅢ双酶切,将所得片段分别插入表达载体pGEX-6P-1和pET28a(+)中,构建了重组质粒pGEX-1gG和pET-4gG。经双酶切和序列鉴定为阳性后,将重组质粒pGEX-1gG转化入大肠杆菌BL21(DE3)、重组质粒pET-4gG转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导表达后对表达产物进行SDS-PAGE分析。结果显示,分别在35和17ku处出现与预期大小相符的目的条带。Western-blot结果证实,目的蛋白均具有良好的反应原性。表明,成功实现了EHV1gG和EHV4gG蛋白的正确表达,初步鉴定其具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 马疱疹病毒 糖蛋白G 原核表达
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大鲵虹彩病毒套式PCR诊断方法的建立及应用 被引量：4
17
作者 王芳 康超 +2 位作者 李永霞 余波 周思旋 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第8期291-293,共3页
根据Gen Bank中大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白MCP基因序列,设计2对特异性的引物,通过对第1步和第2步PCR反应条件进行优化,建立大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白套式PCR诊断方法。结果表明,该方法重复性好,第1次PCR扩增敏感性达10 pg/m L,第2次PCR... 根据Gen Bank中大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白MCP基因序列,设计2对特异性的引物,通过对第1步和第2步PCR反应条件进行优化,建立大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白套式PCR诊断方法。结果表明,该方法重复性好,第1次PCR扩增敏感性达10 pg/m L,第2次PCR敏感性是1 fg/m L,对锦鲤疱疹病毒、斑点叉尾病毒、嗜水气单胞菌、柠檬酸杆菌、黄杆菌DNA扩增结果均为阴性。表明建立的套式PCR方法适合于大鲵虹彩病毒临床样品的快速诊断。 展开更多
关键词 大鲵虹彩病毒 套式PCR 临床样品
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非洲猪瘟病毒分子生物学研究进展 被引量：10
18
作者 南木甲 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第9期51-53,共3页
非洲猪瘟病毒是一种大的DNA病毒,可感染家猪、野猪和软蜱。不同宿主感染后的症状各不相同,只有家猪表现出临床症状,其症状与传统猪瘟相似,以全身出血、呼吸障碍和神经症状为主要特征。目前尚无有效的疫苗用于预防非洲猪瘟,主要通过检疫... 非洲猪瘟病毒是一种大的DNA病毒,可感染家猪、野猪和软蜱。不同宿主感染后的症状各不相同,只有家猪表现出临床症状,其症状与传统猪瘟相似,以全身出血、呼吸障碍和神经症状为主要特征。目前尚无有效的疫苗用于预防非洲猪瘟,主要通过检疫扑杀来控制该病。作者就该病毒的分子生物学研究进展进行了综述并对该病的防制进行了展望。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 分子生物学 研究进展
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鸡马立克氏病病毒在鸡淋巴细胞和羽髓中的复制动力学分析 被引量：16
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作者 李晶梅 刘长军 +4 位作者 张艳萍 施维松 曲鹏 刘爱玲 闫福海 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期879-884,共6页
马立克氏病(MD)是由鸡马立克氏病病毒血清1型(MDV1)引起的鸡高度接触性淋巴细胞增生性疾病,MDV1在体内的复制状况与其致病性强弱及传播能力直接相关。本实验选择近几年从国内不同地区MD暴发鸡场分离的6株MDV1强毒株、弱毒疫苗"814&... 马立克氏病(MD)是由鸡马立克氏病病毒血清1型(MDV1)引起的鸡高度接触性淋巴细胞增生性疾病,MDV1在体内的复制状况与其致病性强弱及传播能力直接相关。本实验选择近几年从国内不同地区MD暴发鸡场分离的6株MDV1强毒株、弱毒疫苗"814"株和国内标准MDV1强毒J-1株,分别人工感染SPF鸡,采用双重实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,检测感染后1d～28d病毒在淋巴细胞和羽髓中的复制状况。结果显示,接种1d后即可在淋巴细胞中检测到MDV1(102.6copies～105.2copies/106cells);在检测期间,淋巴细胞中病毒载量略有上升的趋势,总体呈现不规律变化,而且变化并不明显。接种7d后羽髓中病毒载量开始显著增加,14d～21d达到峰值,超强毒株峰值处病毒载量可达到107copies/106cells,峰值期病毒载量是感染前期(1d～7d)的100～10000倍。强毒株在体内的病毒载量高于弱毒株,即复制能力高于弱毒株。研究表明,MDV1国内流行的毒株有增殖速度快,病毒载量高的新特点;MDV1致病性的高低与在其在体内的复制能力的高低呈正相关。 展开更多
关键词 复制动力学 马立克氏病病毒血清1型 双重荧光定量PCR 分离株 病毒载量
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广西玉林地区MDV强毒YL2002株的分离鉴定 被引量：3
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作者 陈展鸿 罗琼 +6 位作者 杨洁 冯金牛 温良海 何玲 唐满华 黄水洪 陈瑞爱 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期193-201,共9页
广西玉林地区鸡马立克氏病(MD)疫苗免疫鸡群出现MD疫情,笔者从出现MD疫情的规模化肉鸡养殖场采集抗凝血,分离得到MDV野毒株,鉴定为血清Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV),命名为YL2002。与15株参考毒株进行比对,meq基因核苷酸同源性分析结果显示,... 广西玉林地区鸡马立克氏病(MD)疫苗免疫鸡群出现MD疫情,笔者从出现MD疫情的规模化肉鸡养殖场采集抗凝血,分离得到MDV野毒株,鉴定为血清Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV),命名为YL2002。与15株参考毒株进行比对,meq基因核苷酸同源性分析结果显示,YL2002株与JS201801株MDV同源性最高,为100%;与648A株同源性最低,为98.6%。将分离得到的MDV野毒株回归动物实验,分析其对肉鸡品种黄鸡2号的致病性,该分离株攻毒组发病鸡出现瘫痪症状,并发现心脏、肝肿瘤。病理组织学观察可见各组织出现淋巴细胞增生和浸润。致病性结果显示,YL2002攻毒组发病率和死亡率为100%和69.2%。本试验成功分离得到1株MDV强毒株,为广西玉林地区频发的马立克氏病疫情的防控提供了理论基础,也为我国MDV的毒力演化研究提供了参考。 展开更多
关键词 马立克氏病 分离 鉴定 黄鸡2号 致病性
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